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图书名称：《移植医学》【作者】陈知水，陈孝平主编【页数】565【出版社】武汉：华中科技大学出版社,2018.12【ISBN号】978-7-5680-4757-9【价格】228.00【分类】移植术（医学）【参考文献】陈知水，陈孝平主编.移植医学.武汉：华中科技大学出版社,2018.12.图书封面：图书目录：《移植医学》内容提要：本书从器官移植的发展历史出发，分别对器官移植国内外的基础研究（包括同济医院器官移植研究所的基础研究成果）和临床应用进行总结与探讨，同时综合阐述器官移植领域国内外的最新研究进展，具有较高的权威性、先进性、实用性与指导性。为国内首本对器官移植的发展历史、基础研究和临床应用进行深入、全面的阐述和归纳的医学著作。本书可供广大医学院校研究生及从事器官移植工作的医务人员参考使用。《移植医学》内容试读第一篇◇总论Zoglu第一章器官移植发展背景移植医学是医学领域的一门新兴学科，进入21世纪，器官保存技术、外科手术技术、移植免疫学及免疫抑制药物等得到全面发展，器官移植现已成为治疗终末期器官功能衰竭的常规方法。随着我国公民逝世后器官捐献的全面发展，器官移植在我国得到了大力的发展，但是现阶段我国器官移植仍然面临挑战一、器官移植发展简史在公元前300年我国的春秋战国时期，《列子·汤问》就记载了扁鹊换心的故事。这是人类史上有关移植术的最早文字记录。在西方，大量的神话传说、传奇故事及文学艺术作品中也记载了各种移植幻想。直到20世纪初，法国医生Carrel发明了血管吻合技术，器官移植才得以进入动物实验阶段，并为日后的临床应用打下基础。20世纪40年代，英国学者Medawer通过在第二次世界大战期间为烧伤者进行植皮（皮肤移植）逐步揭开了器官移植排斥之谜，指出同种异体之间移植的失败是由于活性免疫细胞所导致的破坏，并由此建立了移植免疫学。在此基础上，人们认识到在无免疫抑制治疗的情况下，单卵双生供受者间的肾移植是可行的。1954年12月23日，经过2年的准备，美国外科医生Murray在波士顿成功地施行了同卵孪生兄弟间肾移植（无排斥型），并获得了长期存活。这一历史性成功还证实，无论对供者还是受者，单肾足以维持正常生命。Murray也因此获得1990年的诺贝尔生理学或医学奖。20世纪50年代后期，随着肾移植在临床的逐步应用，外科医生对其他脏器移植手术也相继开展了探索性研究，1963年开展了肝、肺移植，1966年开展了胰腺移植，1967年开展了心脏移植等。与此同时，其他移植相关技术也得到迅猛发展。1964年Teraaki发明了微量淋巴细胞毒技术，奠定了人类白细胞抗原(HLA)分型方法的基础，为选择良好的供者和受者间的配对提供了可能。1967年，德国Belzer用持续灌注法保存肾脏3天。随后相继开发了Colli液、EuroColli液及SackⅡ液等器官保存液。l988年，美国Wicoi大学研制出新鲜保存液，可保存肝脏30小时、肾脏和胰腺72小时以上，为利用异地获取的器官提供了保障。免疫抑制治疗在此期间也不断取得进展。全身性放疗是最早用于抗排斥的手段，始于1958年。1959年，英国学者CaleR在犬的肾脏移植实验中证实6-巯基嘌呤(6-MP)可以有效延长移植物存活期，并于1960年将其用于人体移植，从而诞生了以糖皮质激素、硫唑嘌呤、抗淋巴细胞球蛋白(ALG)为代表的第一代免疫抑制剂以及联合用药方案。20世纪70年代，DreyfuM发现了环孢素A(CA),而Borel的一系列实验证实了其免疫抑制功能（既对T淋巴细胞具有特异性，又没有骨髓抑制的不良反应)。CaleR在证实CA对多种动物的器官移植具有明显延长存活时间的作用后，大胆将其用于临床，并取得了突破性进展。到目前为止，CA仍是世界上广泛使用的抗排斥药物之一。CA可使器官移植的存活率明显提高，成为器移植医学—从基础到临床官移植发展史上公认的里程碑。进入20世纪90年代，多种免疫抑制剂被开发出来并应用于临床，例如，1994年美国FDA正式批准日本Fujiawa公司研发的他克莫司应用于肝、肾移植，1995年瑞士Roche公司研发的吗替麦考酚酯（骁悉）进入临床，从而形成了以钙调磷酸酶抑制剂联合骁悉和激素的标准三联免疫抑制方案。新型免疫抑制剂的应用进一步减少了排斥反应的发生率，提高了移植物的存活率，使器官移植成为治疗人类终末期器官衰竭的重要手段。据统计，截止到2016年底，全球累计施行肾移植84.3万余例次，近年来每年移植约3万例次；累计施行肝移植19.4万余例次，每年肝移植约1万例次；心脏移植累计8.7万余例次，每年施行约3000例次；胰肾联合移植累计施行2.4万余例次，并出现大批长期存活的受者。二、我国移植历史回顾及现阶段面临的挑战我国的移植工作与国外相比大约滞后10年。20世纪50年代末，武汉、上海、广州、北京等地相继开展了肝、肾移植的动物实验研究。在武汉，以裘法祖、夏穗生为代表的老一辈医学家敏锐地注意到移植医学的兴起，进行了一系列腹部脏器移植的探索性实验研究。1980年经卫生部批准成立同济医院器官移植研究所，成为我国最早的移植医学专业化、系统化研究基地。1960年，北京吴阶平教授率先在国内开展了临床肾移植，开辟了我国临床器官移植的先河，但因缺乏有效的免疫抑制剂，受者未能长期存活。1972年，广州中山医学院第二附属医院开展了国内首例活体肾移植术，并获成功。1977年，上海瑞金医院、武汉同济医院先后开展了肝移植术，揭开了我国大器官移植的序幕。随后，全国各地陆续开展了肝、心、肺、胰腺等器官的移植术。当然，我国器官移植的发展之路并非一帆风顺。在早期临床肝移植成功开展的推动下，20世纪80年代，我国共有18个移植中心开始了临床肝移植工作，共完成57例手术。但由于手术操作、免疫抑制剂及排斥反应监测等方面所限，80%以上的病例均在术后3个月内死亡，最长存活者由夏穗生教授所保持，受者术后存活264天。肝移植工作随后陷入停滞，持续十余年，直至1993年随着黄洁夫、郑树森、叶启发等一批中青年学者从海外学成归国，并伴随着新型免疫抑制剂CA的临床推广使用，临床肝移植工作才重新在中国起步并得到大力发展，并进入成熟应用阶段。同时，随着尸体肝移植存活率的显著提高，王学浩、严律南等教授在我国率先开展活体肝移植并取得成功，目前包括上海交通大学医学院附属仁济医院、天津市第一中心医院、首都医科大学附属北京友谊医院的小儿肝移植工作在数量及临床疗效方面均已步人世界领先行列。其他临床器官移植工作也随着一批年轻有为的开拓者的涌现，使我国每年约有1万人次接受各类器官移植手术，我国也成为仅次于美国的世界第二移植大国。截至2016年底，据中华医学会器官移植学分会中国器官移植登记处统计，全国共施行各种实质大器官移植术12万余例次，包括肾移植10.1万余例次，其中活体肾移植近6000例，尸体肾移植最长存活超过33年；肝移植1.8万余例次，其中活体肝移植1700余例；心脏移植808例，最长存活超过18年；胰肾联合移植200余例，最长存活超过10年；肺移植200余例，最长存活超过7年。此外，国内还曾开展了少量的脾移植、肾上腺移植、甲状旁腺移植和睾丸移植但由于中国器官移植法规管理建设滞后，缺乏组建诸如美国器官共享联合网络、欧洲器官共享网络等专业器官捐献机构的能力：包括广大医务人员在内对“脑死亡”、“植物人”的概念混淆，以及传统文化对“死后全尸”等观念的根深蒂固的影响，器官捐献工作一时难以在中国推开。移植医生为救治器官功能衰竭的病人，将目光投向死囚尸体器官捐献。虽然此项工作对救治广大终末期器官衰竭病人，提高我国临床移植水平起到了至关重要的作用，但也成为西方世界对我国人权问题攻讦的借口，器官移植成为一个非常敏感的“禁区”移植界也曾尝试探索采用公民逝世后器官捐献的方法代替死囚器官的来源。例如，上海、湖北、山东、广东等省在2002一2008年，由陈忠华教授等人以医学科研项目立项进行了130例第一章器官移植发展背脑死亡供体捐献器官手术，但由于无相关配套法规政策等国家层面的支持，“脑死亡”器官捐献项目进展缓慢。“十年磨一剑”。值得庆幸的是，以时任中华人民共和国卫生部副部长的黄洁夫教授所代表的行业领导认识到了阻碍我国器官移植工作发展的关键问题，并开始着手解决。2005年，在西太平洋地区召开的世界卫生组织移植高层会议上，黄洁夫副部长代表中国卫生部向世界做出承诺：中国将改革器官移植体系，逐步立法，彻底改变我国器官来源与分配问题。2006年，卫生部医政司出台了中国第一部卫生行政部门对器官移植行业规范的法规《人体器官移植技术临床应用管理暂行规定》，组建了人体器官移植技术临床应用委员会（○TC)。实施了严格的行业内部评审和准入，将有移植资质的医院减少至164家。并相继建立了国家层面的肝、肾、心、肺、小肠移植术后登记随访系统。2007年3月21日，国务院《人体器官移植条例》（后简称《条例》）颁布，使中国器官移植事业开始走上了一条法制化的轨道。2010年，卫生部与中国红十字会联合启动中国公民逝世后自愿器官捐献试点工作，成立了中国人体器官捐献工作委员会(CODC)2011年，成立了“中国器官捐献管理中心”。随后，两部门联合相继出台了30多个相关器官捐献的配套政策文件，提出中国器官捐献三类死亡判定的科学标准与流程，使一个遵循WHO指导原则并符合我国国情，包括器官捐献体系、器官获取与分配体系、器官移植临床服务体系、器官移植后科学登记体系和器官移植监督体系的器官捐献移植体系初步形成。2013年2月25日，中国宣布全面正式启动公民逝世后器官捐献工作。2015年1月1日起，中国完全停止死囚器官捐献，成功实现移植器官来源转型，所有移植器官均来源于公民自愿捐献，并在当年完成器官捐献2766例：2016年完成器官捐献4080例：2017年完成器官捐献5146例，实施器官移植手术超过1.6万例。经过几十年的发展，我国器官移植事业在各方面都取得了长足的进步，总体上说已接近国际水平。但现阶段我国的器官移植事业仍面临众多挑战。1,供体仍明显短缺以尿毒症为例，我国每年新增透析病人约120万人，但每年肾移植总量约7000例，仅占0.6%左右，供求矛盾十分突出。我国移植用供体器官长期以来依靠死囚，饱受国际社会的指责，也在一定程度上制约了移植事业的发展。2.活体捐赠者的长期健康问题我国的活体捐赠在近几年才规模开展，无论是活体供肝还是供肾，都需要建立长期随访系统，关注捐赠者的健康。如：供肝者的生活质量有无下降？余肝能否满足日常生活需要？捐肾者也如此，尤其是给孩子捐肾的父母，他们在捐肾10年、20年后肾功能到底如何？高血压的发生率是多少？这些问题都需要深入研究。3.受者的长期存活率需进一步提高许多移植中心虽然能开展临床肝、肾移植，但缺乏术后管理经验，排斥反应的诊断依赖于临床而不是病理。耐激素的排斥反应、抗体介导的排斥反应难以逆转，术后间质性肺炎、慢性排斥反应等处理不当，常导致病人死亡及移植肾失功，故总体存活率并不高。长期存活者恶性肿瘤、心血管疾病及新生糖尿病的发病率都有待研究。4.缺乏稳定的早期诊断排斥的指标移植术后排斥反应越早发现，治疗效果越好。长期以来，移植物活检是诊断移植物急性排斥反应和慢性排斥反应的金标准，但是由于观察者水平有差异，导致其在实际应用中并不尽如人意，病理诊断在早期临床中判断治疗效果及预后方面也存在一定不足。因此，很有必要进一步认识排斥的分子机制，建立排斥反应的预警指标。最后必须指出，当前我国器官移植领域中最薄弱的环节是基础研究和建立在循证医学原理上的临床观察系统。国家应重视这片领域的开发，给予相应的投入。只有加深对移植免疫的研究和对移植物慢性失功机制的了解，才有可能进一步降低急、慢性排斥反应的发生率，从而提高病人的生存质量和远期存活率。(张波陈知水夏穗生)。5第二章移植的定义和分类第一节移植的概念移植(tralatatio)是指将某一个体有活力的细胞、组织或器官即移植物(graft)用手术或其他的方法移植到自体或另一个体（异体）的体表上或体内某一部位。移植术并不包括那些能用在体内或固定在体表，不含有人或动物的组织和细胞的物质，如应用假体、人工合成物质或人造器官等。供给移植物的个体称供者(door),接受移植物的个体称受者(reciiet)。移植物的供者和受者不属同一个体，称作异体移植术。供者和受者是同一个体的称作自体移植术。自体移植物重新移植到原来的解剖位置，称作再植术(reimlatatio),如断手再植、断肢再植等。第二节移植的分类(一)根据供者和受者遗传基因的差异程度分类l.自体移植(autotralatatio)移植的细胞、组织或器官取自受者自身并在自体内植入，即供者和受者为同一个体。2.同质移植(iologoutralatatio)又称同基因移植(ygeeictralatatio)或同系移植(iotralatatio)。供者与受者虽非同一个体，但二者遗传基因型完全相同，受者接受来自同系（同基因）供者移植物后不发生免疫排斥反应，如动物实验中纯种同系动物之间的移植、临床应用中的同卵孪生之间的移植。3.同种移植(allotralatatio)供者和受者为同一种属但遗传基因不相同的个体间的移植，如不同个体人与人、狗与狗之间的移植，称同种移植。同种移植为临床最常见的移植类型。因供者和受者遗传学上的差异，术后如不采用合适的免疫抑制措施，受者对同种移植物不可避免地会发生排斥反应。4.异种移植(xeotralatatio)不同种属如猪与人之间的移植，术后如不采用合适的免疫抑制措施，受者对异种移植物不可避免地会发生强烈的异种排斥反应。异种移植又根据供者和受者之间的遗传背景的差异再分为两类，遗传背景差异小、进化关系相近的供者和受者之间的移植称为协调性异种移植(cocordatxeotralatatio),如啮齿类的仓鼠与大鼠、非人灵长类(o-humarimate,NHP)的佛狒与人之间的移植等。其排斥反应发生比较慢，程度较6···试读结束···...

2022-10-15

编辑评论：自体脂肪移植新技术df电子书是一本关于整形美容的书籍。处理方法等自体脂肪移植新技术综述df以清晰翔实的文字，精美丰富的图片和图表为我们介绍自体脂肪移植的各个方面，重点介绍世界知名整形美容外科医生的知识和经验。全书共分七部分，第一部分介绍脂肪细胞的历史、原理、生理和代谢；第二部分介绍脂肪移植的术前准备；第三和第四部分描述了脂肪移植在美容和非美容程序中的应用章节，以及一些非美容项目；第5节处理脂肪处理和生存问题；第6节和第7节处理脂肪移植的并发症、法律和其他相关问题。自体脂肪移植新技术df集锦自1980年代抽脂术问世以来，手术区凹陷问题也随之出现，外科医生采用免费脂肪注射来矫正这些凹陷。1983年，Chajchir尝试使用吸出的脂肪组织来治疗面部凹陷。1986年，Illouz报道了一种使用脂肪细胞移植治疗凹陷畸形的新技术。到1980年代后期，研究重点是机械应力对获得的脂肪细胞的影响以及注射脂肪组织的长期存活率。Colema于1995年通过研究提出离心技术可用于浓缩吸出的脂肪组织，可在全脸采用多层注射移植。自体脂肪移植新技术df章节预览第1章概述第1节自体脂肪组织移植历史第2节自体脂肪组织移植的发展第三节自体脂肪组织移植的共识与争议1、自体脂肪移植的安全性和有效性2、自体脂肪移植的几个重要方面3、自体脂肪移植效果评价4、制定脂肪移植临床实践的必要性参考文献第二章自体脂肪移植的评估与围手术期管理第1节自体脂肪移植评估1、自体脂肪移植的一般评价方法2、受区注射生理盐水第2节自体脂肪移植的围手术期管理1、术前准备2、自体脂肪移植后的处理参考文献第三章自体脂肪提取与纯化第1节.注射器方法1、肿胀麻醉2、选区3、吸引针和注射器的选择4、获取脂肪的具体方法第2节Body-jet自体脂肪移植和吸脂1、全身喷射式流体动力吸脂机收集和净化脂肪的原理2、Body-jet流体动力吸脂系统收集脂肪的一般步骤第3节自体脂肪的纯化1、静态沉淀法2、洗涤过滤法3、纱布棉垫吸附法4、漂洗方法V。离心参考文献第四章脂肪移植方法1、注射器直接注射法2、注射枪法3、螺杆注射法四个。螺旋丸法5、齿轮注射法6、气压丸法7、电推法参考文献第五章自体脂肪移植后的结果及效果评价第1节自体脂肪移植后的结果1、自体脂肪组织移植后的组织学变化2、影响移植脂肪组织体积变化的因素第二节自体脂肪移植效果评价1、直接测量法2、成像测量方法参考文献第6章面部网格分割与精细自体脂肪移植第1节面啮合和术前美学评价1、面部审美标准2、面网格划分三个。术前审美评估方法及网格化审美划分的意义第2节额头网格分割和脂肪移植1、网格划分2、自体脂肪移植Sectio3眉毛网格分割和脂肪移植1、网格划分2、自体脂肪移植第4节鼻网分割和脂肪移植1、网格划分2、自体脂肪移植第5节唇网分割和脂肪移植1、网格划分2、自体脂肪移植第6节额头网格分割和脂肪移植1、网格划分2、自体脂肪移植Sectio7鼻唇沟网格划分与脂肪移植1、网格划分2、自体脂肪移植第8节眼眶网格分割和脂肪移植1、网格划分2、自体脂肪移植第9节颊侧啮合和脂肪移植1、网格划分2、自体脂肪移植第10节网格分区和脂肪移植1、网格划分2、自体脂肪移植第11节。耳朵的网状分区和脂肪移植1、网格划分2、自体脂肪移植第7章自体脂肪移植手部年轻化技术1、适应症2、装备3、自体脂肪颗粒的采集4、脂肪颗粒的制备5、脂肪粒注射6、术后处理7、术后评价8、并发症9、注意事项参考文献第8章组织外扩张器辅助自体脂肪移植和乳房再造1、BRAVA装置的工作原理2、BRAVA装置的临床适应证和禁忌证3、BRAVA装置及其使用方法4、并发症及其处理方法参考文献第9章CAL技术与自体脂肪移植第一节干细胞基础知识1、干细胞的基本特征2、干细胞的基本类型第二节脂肪干细胞基础知识1、脂肪干细胞的发现过程2、普通名词3、脂肪干细胞的基本特征4、脂肪干细胞的研究与应用第3节CAL技术的基本原理1、基本概念2、相关临床实验研究3、CAL技术的机理第四节CAL技术的应用1、使用SVF的CAL技术2、ADSCCAL技术的应用3、干细胞辅助脂肪移植产业化4、CAL技术的适应症第5节CAL技术存在的问题与前景1、细胞分离扩增过程中的问题2、临床应用问题3、前景与前景参考文献第10章PRP/PRF和自体脂肪移植第1节PRP辅助自体脂肪移植1、PRP简介2、PRP的制备方法3、PRP的作用机制4、操作步骤第2节PRF辅助自体脂肪移植1、PRF简介2、PRF与PRP的比较3、PRF的制备4、操作流程参考文献第11章自体SVF辅助颗粒状脂肪移植隆胸第1节概述第2节术前准备1、自体SVF辅助颗粒脂肪移植隆胸的临床适应证和禁忌证2、手术人群的选择3、术前谈话4、术前检查项目V。摄影第3节基本外科手术1、供脂部位及切口选择2、脂肪获取3、SVF提取4、自体SVF辅助颗粒脂肪移植隆胸技术要点第四节术后治疗与护理第5节并发症的发生与预防1、感染2、血肿、血清肿3、脂肪液化4、硬化V。假性囊肿6、色素沉着、感觉变化7、皮肤不均匀8、脂肪栓塞9、隆胸后乳房不对称十个，下垂的乳房第6节术后随访参考文献第12章脂肪移植的其他技术第1节FAMI技术1、操作方法2、操作规范第二节超细脂肪移植技术：基础研究与临床应用1、操作方法2、超细脂肪的临床应用3、总结第3节。粘连和凹陷性疤痕的治疗1、疤痕粘连的治疗2、凹陷瘢痕粘连的特点及治疗...

2022-05-13 自体脂肪移植百科 百度百科自体脂肪移植

图书名称：《半月板移植》【作者】（比）勒内·韦丹柯，（葡）若奥·埃尔奥利维拉-门德斯，（西）琼·查尔斯·蒙劳主编；彭亮权，陆伟，张辉主译【页数】124【出版社】天津：天津科技翻译出版公司,2019.06【ISBN号】978-7-5433-3868-5【价格】68.00【分类】半月板-移植术（医学）【参考文献】（比）勒内·韦丹柯，（葡）若奥·埃尔奥利维拉-门德斯，（西）琼·查尔斯·蒙劳主编；彭亮权，陆伟，张辉主译.半月板移植.天津：天津科技翻译出版公司,2019.06.图书目录：移植》内容提要：本书详细探讨了半月板移植的各个方面，既包括同种异体骨和半月板的替代品的使用，明确地阐述了适应证和手术技巧，并展示了迄今为止所取得的成果。本书紧跟学术前沿，介绍了移植物、新技术和新手术方法，同时也讨论了半月板病变治疗的未来趋势。...

2022-05-10 epub电子书下载 epub电子书资源网

编辑评论：基因克隆与DNA分析第五版详细介绍了分子生物学中基因克隆、基因表达、PCR、基因组学等基础研究技术，系统介绍了基因克隆与DNA分析在实际应用中的应用在基础研究、医学、农学、法医学等方面，第5版增加了生物制药、基因治疗、转基因作物等新进展编辑推荐本书分为三个部分。部分描述了基因克隆和DNA分析的基本原理。包括基因克隆、基因操作、基因克隆载体、酶、DNA纯化、DNA导入活细胞、PCR技术等。第二部分介绍基因克隆和DNA分析在研究中的应用。包括基因定位研究、基因结构预测、基因表达与功能研究、基因组研究等。第三部分阐述了基因克隆和DNA分析在生物技术、医学、农业、法医学中的应用。、考古学等学科。本书通俗易懂，即使读者没有太多的分子生物学基础知识，也能理解这些知识。本书适合作为高等院校生物系和农林医工类院校的教学参考书，也可供生命科学研究人员、商务人员、中学生物教师及有兴趣的人士阅读。学习当代生命科学。遗传学的早期发展在最初的30年里，这一新兴学科以惊人的速度向前发展：W.Sutto于1903年首先提出基因位于染色体（chromoome）上，然后在1903年，1910年，这一假设被T.H.摩根的实验；接下来，Morga和他的同事开发了基因作图技术，在1922年获得了全部4只果蝇。综合分析单条染色体上2000多个基因的相对位置。但是，尽管经典遗传学研究取得了这些辉煌成就，但直到1940年代，基因的分子性质仍未被理解。事实上，直到1944年Avery、MacLeod和McCarty的实验以及1952年Herhey和Chae的实验之前，没有人会相信脱氧核糖核酸（DNA）是遗传物质，因为在此之前，人们普遍认为基因是由蛋白质组成的。DNA作用的发现极大地推动了遗传学的研究，这一时期的许多著名生物学家（德尔布莱克、查格夫、克里克和莫诺德最有影响力）都在第二个发展高峰期做出了突出贡献。这一时期的成果是惊人的：从1952年到1966年的14年间，DNA的结构被精确描述，遗传密码被破解、转录和翻译的过程被描述了。如何使用本书本书解释了如何进行基因克隆、PCR和其他DNA分析技术，并描述了这些技术在现代生物学中的应用。这些应用的介绍是需要详细讲解的第2、三部分。第二部分主要介绍基因和基因组的研究进展，第三部分全面介绍了基因克隆和PCR在生物技术中的广泛应用。我们将在第一部分处理一些基本原则。这9章大部分都围绕基因克隆展开，因为该技术比PCR更复杂。当您了解克隆的工作原理时，您也了解了DNA分析的许多基本原理。在第2章中，我们主要关注基因克隆实验的核心部分——载体，它负责将要克隆的基因转运到宿主细胞中，并使这部分基因在后续步骤中进行复制。作为克隆载体的DNA分子必须首先能够进入宿主细胞，并且一旦进入宿主细胞，就能够自我复制以产生多个拷贝。在自然条件下，两个DNA分子满足这些要求：(1)质粒，一种在细菌和一些其他生物中发现的小的环状DNA，能够独立于宿主染色体进行复制。(2)病毒染色体，尤其是噬菌体（一种特异性感染细菌的病毒）的染色体。在感染过程中，细菌DNA分子被注射到人类宿主细胞中进行复制和扩增。第3章介绍了如何从活细胞中纯化DNA，包括要克隆的DNA和载体DNA，第4章介绍了处理纯化DNA分子的各种实验室技术。有很多这样的技术，但其中有两个是特别重要的。它们是：在特定位点切割载体并在插入基因后修复载体的技术（图1.1）。这些和其他DNA操作技术是作为在活细胞中进行的基本DNA分析和修饰技术的分支而开发的，并且这些操作技术中的大多数使用纯化的酶。第4章介绍了这些酶的特性以及它们在DNA研究中的应用方法。一旦构建了重组DNA分子，就必须将其引入宿主细胞进行复制。将重组体转化入人宿主细胞的方法利用宿主细胞的自然过程来获得质粒和病毒DNA分子。这些程序及其在基因克隆中使用的方法在第5章中介绍，最重要的克隆载体类型及其测试在第6.7章中介绍。第8章总结了基因克隆，还讨论了重组选择的问题（图1.4）。第9章主要详细介绍PCR和一些相关技术。...

2022-05-07 基因克隆宿主细胞 基因克隆受体细胞

编者注：分子克隆实验指南PDF版前两版《分子克隆实验指南》作为分子生物学实验的经典参考书，已被使用了近20年，享有无与伦比的声誉。今天，小编为大家准备了《分子克隆实验指南》第一卷。书籍，下一卷的主编会继续出，大家可以期待简介《分子克隆实验指南（第3版）（套装第2卷和第2卷）》简介：《分子克隆实验指南》前两版因其无与伦比的声誉已经使用了近20年。分子生物学实验的经典参考书。在第三版中，作者对本书内容进行了全面升级，修改了每一个实验方案，添加了大量新材料，拓宽了涵盖的领域。内容丰富详尽，对研究遗传学、分子细胞生物学、发育生物学等有用，对微生物学、神经科学和免疫学等科学具有重要的指导和参考价值。《分子克隆实验指南（第3版）（套装2、2卷）》具有先进、实用、权威的特点，是生命科学实验室当之无愧的“圣经”。《分子克隆实验指南（第3版）（成套第2、2卷）》可供生物、医药卫生、农林畜等领域的科研、教学和技术人员参考畜牧业。相关内容部分预览目录译者顺序[1]第四版前言第1卷第1章DNA分离和定量1引言2方案1通过SDS碱性裂解制备质粒DNA：Mii-Pre9方案2通过SDS碱性制备质粒DNA裂解：大规模制备12方案3从革兰氏阴性细菌（如Ecolz）中分离DNA15方案4乙醇沉淀DNA17方案5异丙醇沉淀DNA21方案6使用微量移液器浓缩器浓缩和脱盐核酸22方案7丁醇提取法浓缩核酸23方案8聚乙二醇沉淀制备Ml3噬菌体单链DNA24方案9Ml3噬菌体电镀27方案10Ml3噬菌体的液体培养30方案11Ml3噬菌体的双链（复制）DNA的制备32方案12使用有机溶剂分离和纯化高分子量DNA35方案13使用蛋白酶K隔离用苯酚从哺乳动物细胞中提取高分子量DNA37方案14从细胞或组织中一步同时提取DNA、RNA和蛋白质43方案15从小鼠尾巴或其他小样本中制备基因组DNA46替代方案：在没有有机溶剂的情况下从小鼠尾巴中分离DNA48替代方案：从小鼠尾巴中分离DNA的单管方法49方案16酵母DNA的快速分离50方案17微凝胶估计DNA数量电泳后使用溴化乙锭(EB)的条带52方案18使用Hoecht33258荧光分析仪估计DNA浓度53方案19使用PicoGree对溶液中的DNA进行定量55信息栏56第2章DNA分析62介绍63方案1琼脂糖凝胶电泳73方案2琼脂糖凝胶中DNA的染色检测76方案3聚丙烯酰胺凝固凝胶电泳80方案4染色检测D聚丙烯酰胺凝胶中的NA85协议5聚丙烯酰胺凝胶中DNA的放射自显影检测86协议6碱性琼脂糖凝胶电泳87附加协议：碱性琼脂糖凝胶的放射自显影90协议7成像：放射自显影和光敏成像91协议8使用玻璃珠从琼脂糖凝胶中回收DNA96协议9从低熔点琼脂糖凝胶中回收DNA：有机溶剂萃取98协议10从聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA片段：粉碎和浸泡法101ltrgt方案11南方印迹103方案12南方印迹：DNA从一个琼脂糖凝胶同时转移到两个膜110方案13使用放射性标记探针对膜固定核酸DNA进行南方杂交112附加方案：洗脱膜探针117信息框119第三章质粒载体克隆与转化122引言123方案1Haaha方法f或感受态大肠杆菌的制备和转化：高效转化策略126方案2Ioue感受态大肠杆菌的制备和转化方法：“超级感受态”细胞131方案3大肠杆菌的简单转化：纳米颗粒-介导转化135替代方案：一步制备感受态大肠杆菌：在同一溶液中转化和储存细菌细胞136方案4通过电穿孔转化大肠杆菌1387L方案5质粒载体克隆：定向克隆143方案6质粒载体克隆：平末端克隆145方案7质粒DNA的去磷酸化148方案8添加磷酸化接头/接头到平末端DNA150方案9克隆PCR产物：扩增DNA末端添加限制性位点151方案10克隆PCR产物：平末端克隆154方案11克隆PCR产物：制作每个T载体157方案12克隆PCR产品：TAcloe159方案13克隆PCR产物：TOPOTA克隆​​161方案14使用X-Gal和IPTG筛选细菌菌落：a-互补165信息栏167第4章Gateway重组克隆205ltrgt简介206方案1扩增Gatewav载体210方案2制备开放阅读框入口克隆和目标克隆213方案3使用多位点LR克隆反应制备目标克隆219信息领域222第5章细菌人工染色体和其他高容量载体的应用223引言224方案1BACDNA的微量分离和PCR检测235方案2BAC的质量制备和线性化DNA238方案3脉冲电场凝胶电泳检测BACDNA的质量和数量241方案4两步BAC工程：制备穿梭载体DNA242方案5同源臂（A-Box）与B同源制备源arm(B-Box)244方案6将A和B同源臂克隆到穿梭载体247方案7重组穿梭载体的制备和测试249方案8将重组穿梭载体转化为感受态BAC宿主电穿孔细胞7L251方案9检查共复合物和筛选重组BAC克隆253方案10一步BAC修饰：质粒制备256方案11制备A同源臂（A-Box)259方案12将A同源臂克隆到报告穿梭载体260方案13用RecA载体转化BAC宿主263方案14将报告载体转移到BACiRecA细胞和筛选共组合265方案15酿酒酵母的生长和DNA制备267方案16酵母DNA的小量制备269信息框270第6章从真核细胞中提取、纯化和分析RNA275引言276方案1来自哺乳动物的总RNAfrom细胞和组织279从小样本中提取RNA的替代方法281方案2斑马鱼胚胎和成虫的总RNA282方案3黑腹果蝇的总RNA283方案4从C中提取总RNA.elega285方案5使用热酸性苯酚从酿酒酵母中提取总RNA287方案6RNA定量和储存289方案7RNA乙醇沉淀295方案8去除RNA样品中的DNA污染通过无RNaeDNaeI处理297方案9用oligo(dT)磁珠提取oly(A)+mRNA298方案10按大小分离RNA：含甲醛的琼脂糖凝胶电泳308方案11分离RNA按分子量大小：尿素变性聚丙烯酰胺凝胶RNA电泳312方案12琼脂糖凝胶固定化中的膜和变性RNA319替代毛细管向下转移323方案13Polyac电转移芳酰胺凝胶和膜固定325方案14Norther杂交327方案15纯化RNA的点和槽杂交330方案16用核酸酶Sl342映射RNA方案17核糖核酸酶保护测定：用核酸酶定位RNARNae和放射性标记RNA探针349方案18引物延伸方法分析RNA355信息框359第7章聚合酶链式反应363简介364方案1基本PCR375方案2热启动PCR380方案3着陆PCR383方案4高GC含量模板的PCR扩增385ltrgt方案5长高保真PCR(LAPCR)390方案6反向PCR393方案7嵌套PCR397方案8扩增mRNA逆转录产物cDNA：两步法RT-PCR400方案9从mRNA的5'端快速扩增序列：5'-RACE409方案10快速扩增mRNA3'端的序列：3'-RACE416Protocol11使用PCR筛选克隆422信息栏424第8章生物信息学431介绍432协议1使用ucc基因组浏览器可视化基因组注释434协议2序列比对和同源性搜索使用BLAST和ClutalW444协议3使用Primer3Plu450进行PCR引物设计协议4使用微阵列和RNA-eq461进行表达序列分析协议5数以亿计的短读取映射到参考基因组472协议6ChIP-eq数据集中富集区域的识别（峰值发现）483协议7顺式调控基序的发现495信息专栏503ltrgt第二卷第9章用Real定量检测DNA和RNA-时间荧光聚合酶链式反应509介绍510方案1优化实时PCR的引物和探针浓度532方案2制备标准曲线537方案3定量实时PCR检测ofDNA540方案4RNA定量实时PCR检测542方案5实时PCR实验数据分析和标准化545信息框550第10章核酸平台技术551简介552方案1印刷微阵列560方案2轮A/轮BDNA扩增564方案3核小体DNA和其他小于T7的500DNA(TIAD)线性扩增(TIAD)567方案4RNA的扩增572方案5用Cvaie-dUTP578直接标记RNA方案6用氨基烯丙基-dUTP58间接标记RNA1方案7用Kleow酶583标记DNA的花青-dCTPrgt协议8DNA的间接标记585协议9在自制微阵列上阻断多聚赖氨酸587协议10微阵列的自制杂交589第11章DNA测序595介绍596协议1通过毛细管测序620制备质粒亚克隆方案2制备通过毛细管测序对PCR产物进行离子化625方案3循环测序反应627方案4全基因组：手动文库准备630方案5全基因组：自动无索引文库准备636附加方案自动文库准备642方案6全基因组：自动索引库制备644方案7制备用于Illumia测序的3k双端文库651方案8制备用于Illumia测序的8k双端文库659其他协议AMPureMageticBeadCaliratio671协议9RNA-Seq：RNA逆转录为cDNA及其扩增673附加协议RNACleaXI'磁珠纯化/RNA-Seqre)679协议10液相外显子组cature680附加方案AMPureXP磁珠纯化688附加方案琼脂糖凝胶大小筛选689方案11自动大小筛选690方案12使用SYBRGree-qP进行文库定量CR693方案13使用PicoGree荧光696进行文库DNA定量方案14文库定量：使用Quit系统700对双链或单链DNA进行荧光定量方案15制备用于454测序的小片段文库702方案16单链DNA文库和emPCR的捕获708方案17Rochei454测序：执行测序运行714方案18结果验证721方案19测序数据质量评估723方案20数据分析724信息框725第12章哺乳动物细胞中的DNA甲基化分析729引言730方案1DNA亚硫酸氢盐测序以检测单个核苷酸的甲基化735方案2特异性DNA甲基化通过甲基化特异性聚合酶链反应检测基因742协议3基于甲基化胞嘧啶DNA甲基化分析技术的免疫沉淀745协议4哺乳动物通过高通量深度测序进行细胞DNA甲基化作图749方案5Roche454亚硫酸氢盐转化DNA文库的克隆测序760方案6亚硫酸氢盐转化DNA文库的Illumia测序765信息框770第13章制备标记的DNA、RNA和寡核苷酸探针775简介776方案1随机引物方法：通过随机寡核苷酸延伸标记纯化的DNA片段792方案2随机引物方法：通过存在的随机寡核苷酸延伸标记DNA798熔化的琼脂糖ltrgt方案3通过切口平移标记DNA探针800方案4通过聚合酶链式反应标记DNA探针804附加方案不对称探针808方案5体外转录合成单链RNA探针针809附加协议通过PCR816将噬菌体编码的RNA聚合酶启动子添加到DNA片段协议6从mRNA随机合成cDNA探针寡核苷酸引物818方案7通过随机寡核苷酸延伸制备放射性标记的消减cDNA探针820方案8用大肠杆菌DNA聚合酶I825的Kleow片段标记双链DNA的3'端方案9使用碱性磷酸盐通过酶对DNA片段进行去磷酸化831方案10含有5'突出羟基末端的DNA分子的磷酸化833方案11去磷酸化平端或5'凹陷DNA分子的磷酸化836方案12寡核苷酸的5'末端用T4多核苷酸激酶839方案13用末端脱氧核苷酸转移酶841标记寡核苷酸的3'末端使用TdT标记的探针843替代性合成非放射性附加方案尾反应843附加协议非放射性标记探针844的合成修饰协议14用KleowF标记合成寡核苷酸大肠杆菌DNA聚合酶片段I845方案15通过乙醇沉淀纯化标记的寡核苷酸849方案16通过尺寸排阻色谱法纯化标记的寡核苷酸850方案17通过Se-PakCl8柱色谱法纯化标记的寡核苷酸寡核苷酸852方案18寡核苷酸探针在水溶液中的杂交：用季铵盐在缓冲液中洗涤854信息框857第14章体外诱变方法871查询872方案1随机诱变使用容易出错的DNA聚合酶879方案2重叠延伸PCR产生插入或缺失诱变890方案3使用双链DNA作为模板的体外诱变：使用DI主体选择突变897方案4突变体B-内酰胺酶选择方法位点诱变904方案5寡核苷酸定向诱变/通过单个限制性位点消除的USE诱变)910Protocol6使用密码子盒插入的饱和诱变915方案7随机扫描诱变922方案8多位点定向诱变926方案9基于PCR的Megarimer诱变930信息框933第15章将基因引入培养的哺乳动物细胞937引言938方案1阳离子脂质试剂介导的DNA转染942使用DOTMA和DOGS转染的替代方案948用于检测B的附加方案单层组织化学染色-半乳糖苷酶950方案2磷酸钙介导的质粒DNA转染真核细胞952替代方案磷酸钙介导的质粒高效DNA转染真核细胞956方案3磷酸钙介导的高分子量转染基因组DNA进入细胞959替代方案磷酸钙介导的贴壁细胞转染962替代方案钙介导的Tra悬浮生长细胞的fectio963方案4DEAE-葡聚糖介导的转染：一种高效转染方法964DEAE-葡聚糖介导的替代转染：增强细胞活力的方案966方案5DNA电穿孔用于转染968协议6通过alamarBlue方法972分析细胞活力协议7通过乳酸脱氢酶方法974分析细胞活力协议8通过MTT方法分析细胞活力977信息框980第16章将基因引入哺乳动物细胞：病毒载体998引言999方案1通过直接克隆构建重组腺病毒基因组1019方案2释放克隆的重组腺病毒基因组以进行拯救和修复扩增1023方案3氯化铯梯度沉降法纯化重组腺病毒1028方案4限制性内切酶消化纯化重组体的鉴定腺病毒基因组1031方案5通过TCID50终点稀释结合qPCR1034测定重组腺病毒感染滴度为qPCR1042制备DNA标准品的附加方案方案6复制能力腺病毒(RCA)的浓缩传代和重新检测1043通过al-TimeqPCR方案7通过瞬时转染制备rAAV1051方案8通过氯化铯梯度沉淀纯化rAAV1054方案9碘克沙醇通过梯度离心纯化rAAV1059方案10肝素亲和色谱法纯化rAAV21062方案11通过阴离子交换柱色谱法从碘克沙醇梯度离心的rAAV样品中富集全包装病毒1065rgt方案12用1068实时定量PCR方法测定rAAV基因组拷贝数ltrgtProtocol13TCID50终点稀释结合qPCR法灵敏测定rAAV染色效价1071方案14通过负染色和高分辨率电子显微镜观察rAAV样品的形态1074方案15通过银染SDS-PAGE分析rAAV纯度1076方案16制备高滴度逆转录病毒和慢病毒载体1079方案17慢病毒载体的滴定1085方案18监测慢病毒载体中具有复制能力的病毒1089信息专栏1091第2卷第17章使用报告基因分析基因表达调控基因系统1102简介1103方案1哺乳期测定动物细胞提取物中的B-半乳糖苷酶1112附加方案检测B-半乳糖苷酶活性的化学发光测定1115方案2单荧光素酶报告基因测定1118方案3双荧光荧光素酶报告基因检测1123方案4通过ELISA定量检测绿色荧光蛋白1128方案5通过Regulati建立细胞系1131g基因表达与四环素附加方案限制稀释法筛选悬浮细胞克隆稳定性1138信息框1140第18章RNA干扰和小RNA分析1170简介1171方案1双链iRNA的制备1185方案2在哺乳动物中通过转染双链iRNA对细胞的RNA干扰1187方案3通过转染双链iRNA1190对果蝇S2细胞的RNA干扰方案4dRNA通过体外转录1192方案5用dRNA浸泡的果蝇S2细胞执行RNAi1196方案6使用dRNA转染在果蝇S2细胞中的RNAi1198方案7小RNA的Norther印迹分析1199方案8小RNA的倒置转录定量PCR分析1203方案9小RNA高通量测序文库的构建1206方案10抑制反义寡核苷酸的制备itmiRNA功能1215协议11哺乳动物细胞中的反义寡核苷酸正义寡核苷酸对miRNA功能的抑制1216协议12果蝇S2细胞中反义寡核苷酸对miRNA功能的抑制1218信息框1219第19章克隆基因表达和靶蛋白纯化和分析1225介绍1226方案1使用IPTG诱导型启动子在大肠杆菌中表达克隆基因1249附加方案用于靶标可溶性表达的小规模蛋白质1255替代方案使用阿拉伯糖BAD启动子在大肠杆菌中表达克隆基因1260替代方案信号肽融合白色1261的亚细胞定位方案2通过杆状病毒表达系统表达克隆基因1265附加方案用于确定杆状病毒原液滴度的吞噬斑块测定1271制备用于转染的杆粒DNA的替代方案昆虫细胞的离子1274方案3使用甲醇诱导型启动子AOX1在毕赤酵母中表达克隆基因1277附加方案酵母培养物1287的冷冻保存方案4制备细胞提取物以纯化可溶性蛋白大肠杆菌1291附加方案酵母细胞珠裂解1296替代方案用于制备大肠杆菌细胞提取物的温和热诱导酶解1298用于制备大肠杆菌细胞提取物的替代方案1300通过组合溶菌酶裂解和冻融方法使用固定化金属亲和层析的方案5多组氨酸标记蛋白的纯化1302附加方案Niz+-NTA树脂的清洗和再生1309替代方案组氨酸标记的快速LC纯化蛋白质1310方案6使用谷胱甘肽通过肽树脂亲和层析纯化融合蛋白1314方案7溶解表达包涵体中的ed蛋白1321方案8蛋白质1325的SDS-PAGE替代方案SDS-PAGE凝固考马斯亮蓝各种凝胶染色方法1335替代方案SDS-PAGE凝胶染色银盐1336方案9蛋白质免疫印迹分析1340方案10测定蛋白质浓度的方法1347信息专栏1353第20章使用交联技术分析染色质结构和功能1358简介1359方案1甲醛交联1369方案2制备用于染色质免疫沉淀的交联染色质1371方案3染色质免疫沉淀(ChIP)1373方案4染色质免疫沉淀沉淀-定量聚合酶链式反应(ChIP-qPCR)1377协议5染色质免疫沉淀-芯片杂交(ChIP-chi)1378协议6染色质免疫沉淀-高通量测序(ChIP-eq)1385协议col7交联细胞3C文库的制备1389方案8环状染色质免疫沉淀（ChIP-loo）文库的制备1393方案9连接产物对照文库的制备1398方案103C中3C连接产物的PCR检测,ChIP-loo和控制库：库滴定和相互作用频率分析1400协议113C、ChIP-loo和控制库的4C分析1404协议12ChIP-loo和控制库的3C、5C分析1408ltrgt信息框1412第21章通过紫外交联免疫沉淀(CLIP)进行体内RNA结合位点图谱(CLIP)1415简介1416协议1优化CLIP实验中免疫沉淀的严格性1424协议2活细胞的紫外交联和裂解物制备1429方案3RNae滴定、免疫沉淀和SDS-PAGE1432方案43'-接头的连接通过SDS-PAGE1441选择大小替代去磷酸化RL3接头的5末端标签1445协议5RNA标签的分离、5连接双接头和逆转录PCR扩增1446ltrgt协议6RNACLIP标签测序1456协议7RNA适配器凝胶回收和存储1458信息框1460第22章网关兼容酵母单杂交和双杂交系统1464介绍1465ltrgt方案1酵母单杂交DNA诱饵菌株的构建1474替代方案方案使用复性引物从DNA诱饵中获得入门克隆1481方案2酵母双杂交DB-诱饵菌株1484的生成方案3从激活域捕获库中识别相互作用分子1490方案4高效酵母转化1496方案5B-半乳糖苷酶活性的菌落转移比色测定1500方案6酵母克隆PCR1502信息框1504附录1试剂和缓冲液1507附录2常用技术1533ltrgt附录3检测系统项目1541附录4通用安全原则和危险材料1565索引1573史上最完整的生物实验技术核酸包括DNA和RNA两种分子，在细胞内以与蛋白质结合的状态存在。核酸提取是分子生物学实验技术中最重要、最基础的操作。载体的构建原理：依靠限制性内切酶、DNA连接酶等修饰酶的作用，对目的基因和载体DNA进行适当的切割和修饰后，将两者连接在一起，导入宿主细胞以实现目标基因在宿主细胞中的正确表达。今天小义要分享的是分子实验技术资源包，不仅更详细地阐述了分子实验技术的具体操作和流程，而且对基本原理和原理进行了深入的分析。各种技术的相关理论基础。课程内容：“向量的构造与识别”相关实验1.常见的载体2、克隆载体的构建3．表达载体的构建4．慢病毒载体5．腺病毒载体6．融合蛋白表达载体构建及质粒提取与分析的设计“核酸提取技术”相关实验1．DNA提取2．q-PCR3．RNA提取4．普通PCR5．实时定量PCR（realtime-QPCR）6．逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）“差异基因表达谱技术”1．基因测序技术培训班（基因组）2．基因测序技术培训班（转录组）3．基因芯片4．基因组学与蛋白质组学《细菌转化与细胞转染技术》1．细胞转染2．细菌转化3．iRNA转染操作视频（操作视频+课件）4.细菌转化-电穿孔法原理及操作视频《外源基因表达鉴定技术》1．ELISA技术2．Norther印迹技术3．RT-PCR技术4．蛋白质印迹技术5．酶联免疫吸附试验（ELISA）（视频+课件）6.Weterlottig（视频+课件）《蛋白质-核酸相互作用技术》1.凝胶迁移实验2．CHIP染色质共免疫沉淀法介绍3．蛋白质-核酸相互作用4．GelMigratioExerimet(EMSA)(Video+Coureware)5.Chromatiimmuoreciitatio(ChIP)(video+coureware)"ProteiIteractioTechology"1.GSTettlemettechology2.Yeattwo-hyridtechology3.Co-immuoreciitatiotechology4.Cellcolocalizatiotechology《ReorterGeeAalyiTechology》1.Ivivoreortergeeexerimet2.Ivitroreortergeeexerimet"GeeRecomiatio+Kockout+TargetigTechology"1.Geeticrecomiatiotechology2.Geetargetigtechology3.Geekockout4.GeecloigadDNAaalyi5.Trageicaimaltechology《StemCellSearatio,CultureadPurificatioTechology》1.CollectioofCacerStemCellCultureTechology2.Iolatioadidetificatioofcacertemcell3.Iolatioadcultureofratoemarrowmeechymaltemcellywholeoemarrowmethod(video+coureware)4.Iolatio,cultureadurificatioofhumaemryoictemcell5.Iolatio,cultureadurificatioofhumahematooietictemcell6.Iolatio,cultureadurificatioofmouemeechymaltemcell7、Baice-ookoftemcell8.Iolatio,cultureadurificatioofhumalaceta-derivedmeechymaltemcell"SmallRNAGeeEditigTechology"1.miRNAcloe+miRNART-PCR+miRNAqPCRrimerdeig2.miRNANortherBlot3.miRNAiituhyridizatio4.miRNAfuctioalcreeigadidetificatio5.IdetificatioofmiRNAtargetgee6.iRNAexerimet"No-codigRNADataaeadOlieAalyiTool"1.miRNA-lcRNArelatiohiredictiodataae2.miRNAtargetgeeredictiodataae3.miRNArelateddataae4.rRNArelateddataae5.iRNArelateddataae6.oRNArelateddataae7.RNArelateddataae8.tRNA-relateddataaeHigh-defiitiooeratioofmoleculariologyexerimetaltechologyHDvideotutorial+coureware1.DNAmethylatiodetectio2.Molecularcloigtechology3.High-reolutiomeltigcurveaalyi(HRM)4.IituhyridizatioCellexerimettechologyhigh-defiitiooeratiovideotutorial+coureware1.Ratkeletalmuclecellculture2.Cellaage3.Cellcryoreervatio4.Cellrecovery5.Cellcratche6.Cellivaio7.RatmoothmuclecellculturedytiuelockadherecemethodHigh-defiitiocoure+courewareofroteidetectioexerimetaltechology1.TUNELaaytodetectcellaotoi2.Immuohitochemitry(IHC)Proficietimoleculariologyexerimetaltechologye-ookwithzerofoudatio1.Modermoleculariologytechiqueadexerimetalkill2.RefiemetofMolecularBiologyExerimetGuide3.MolecularCloigExerimetGuide4thEditio(Volume1)4.MolecularCloigExerimetGuide4thEditio(Volume2)5.MolecularCloigExerimetGuide4thEditio(Volume2)...

2022-05-06 DNA寡核苷酸 dna寡核苷酸退火

编辑评论：基因克隆与DNA分析第七版讲解基因克隆、基因表达、PCR、基因组学等分子生物学基本技术原理，生动介绍基因克隆和DNA的实际应用在基础研究、医学、农学、法医学等方面的分析。第7版在大家关心的生物制药、基因治疗、转基因作物等方面做了很多扩展。质粒的分类天然存在的质粒最有用的分类是基于质粒的主要特征，而这些主要特征又基本上由质粒的基因决定。按照这种分类方法，质粒分为以下五类：(1)生育力质粒或F质粒，仅携带转移基因，除促进质粒间性结合转移外没有其他特性，如大肠杆菌中的F质粒。(2)耐药质粒或R质粒携带的基因可以赋予对一种或多种抗菌剂的耐药性，例如对氯霉素、氨苄青霉素或汞的耐药性。R质粒在临床微生物学中很重要，因为它们是通过正常繁殖传播的，可以对细菌感染的治疗产生深远的影响，例如RP4，它通常存在于假单胞菌中，但也可以在其他细菌中出现。lt/gt(3)Col质粒编码coliacti，一种可以杀死其他细菌的蛋白质，如大肠杆菌的ColE1质粒，(4)降解质粒使宿主菌能够代谢一些通常不可用的分子，如甲苯和水杨酸，如恶臭假单胞菌中的TOL质粒。(5)毒力质粒赋予宿主细菌致病性，如根癌农杆菌(Agroacteriumtumefa-cie)Ti质粒(Ti质粒)，可诱导双子叶植物冠薄瘤。细菌以外的生物体中的质粒虽然质粒在细菌中无处不在，但在其他生物体中却不太常见。在真核状态下最具特征的质粒是在酿酒酵母菌株中观察到的2um质粒(2umcirele)。2um质粒的发现是非常幸运的，因为人们可以从中构建载体来转化酵母这种非常重要的生物。然而，对其他真核生物（如纤维霉菌、植物和动物）中质粒的研究已证明令人失望，这表明许多高等生物细胞似乎并不适合放置质粒。溶原性噬菌体与裂解性感染相比，溶源性感染的特点是在宿主细胞中稳定存在噬菌体DNA分子，可能在数千次细菌细胞分裂之后。对于许多溶原性噬菌体，噬菌体DNA作为附加体插入插入到细菌基因组中。这种整合形式的噬菌体DNA[称为原噬菌体]是一种不感染的静止状态，而携带原噬菌体的细菌[这里是溶原菌（溶原菌）]通常在生理上与未感染的细菌细胞无法区分。然而，原噬菌体最终从宿主细胞基因组中释放出来，噬菌体恢复为裂解形式，细胞被裂解以释放后代噬菌体。图2.7所示的进入噬菌体[lamda())]的感染周期是典型的溶原性噬菌体感染周期。一小部分溶原性噬菌体经历完全不同的感染周期。当M13或相关噬菌体感染大肠杆菌时，新的噬菌体颗粒不断组装并从宿主细胞中释放出来。M13DNA没有整合到细菌基因组中，因此不会变得静止。对于这样的噬菌体，永远不会发生细胞裂解，受感染的细菌会继续生长和分裂，但速度比未受感染的细菌慢。...

2022-04-16 质粒是细菌的 质粒 细菌污染