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2023-12-30

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2023-12-30 高聚物玻璃态 高弹态

图书名称：《通过热与温度的分析理解分子集合》【作者】那仁格日乐著【页数】177【出版社】北京：北京邮电大学出版社,2018.12【ISBN号】978-7-5635-4336-6【价格】28.00【分类】聚集体-研究【参考文献】那仁格日乐著.通过热与温度的分析理解分子集合.北京：北京邮电大学出版社,2018.12.《通过热与温度的分析理解分子集合》内容提要：本书主要从自然科学物质世界的日常性出发，与其背后的普遍的、抽象的热力学原理为结合点，详细阐述了从卡诺、克劳修斯开始的热力学的发展历史，柔粘性结晶，非平衡状态的物质-玻璃状态，特殊重要的物质-水等自然科……...

2023-12-27 集合的概念视频讲解高一数学 集合竞价挂单成交规则

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初中化学实验演示视频大全1-10镁燃烧氧气的实验室制法有关分子性质，化学实验是个非常重要的考点，帮助学习！初中物理在掌握方法的情况下是不难的，理解概念：概念是对事物认识的定义。有一定的定义规则，知识内延和外延。运用规律：学会对规律的正确运用。规律不是死的，是在一定条件下才成立，因此你需要知道，什么情况下用阿基米德原理，什么时候用杠杆原理，什么情况是电流与电压成正比等。综合把握题意，分清主次是解题的前题，这是对付综合性较强题目的原则。初中化学是较为零碎的入门学科，不像物理较为系统。当然初中物理和化学都只是皮毛而已。只不过，学习物理需要较强的思维能力，分析能力，需要抽象与形象的结合，也需要一定的数学基础。而初中化学基本上掌握几个概念、定义及几个规律就可以了，学起来要简单。从锻炼思维能力的角度上讲，我袁欢学物理，实验也很多，能引发思考！1、镁在空气中燃烧：2Mg+O2点燃2MgO2、铁在氧气中燃烧：3Fe+2O2点燃Fe3O43、铝在空气中燃烧：4Al+3O2点燃2Al2O34、氢气在空气中燃烧：2H2+O2点燃2H2O5、红磷在空气中燃烧：4P+5O2点燃2P2O56、硫粉在空气中燃烧：S+O2点燃SO2化学实验是可以让你对课本知识更加印象深刻的做法，所有的化学反应都会让人印象深刻，从而对化学产生兴趣！...

2022-12-14 制作氧气化学实验 氧气化学实验

很多学生都不爱学生物，因为生物要学的知识太多了，22届-高三生物张鹏暑假班A+高考细胞分子基础生命，轻松学生物！关于必修第一册，我想说的是，要记的东西比较多而且是正个生物的基础重点,新陈代谢这一块在生物中是起主导地位的,而且考试绝对是会出题目的!第一册的学习主要是一记忆为主!生物很多东西比较细,教材的话包括小字部分也不容忽视的,那些也是会考的!学习的话可以买一本参考书和没章节的配套试题,参考书的话可以让你知重点,有的放矢!试题没章节学完后自己测试自己,就可以知道哪些是还没有搞清楚的，这样就可以知道自己薄弱的地方,还可以了解一下高中生物题目的出题深度和技巧!不做题是绝对不行的2.必修第二册:主要是遗传,这也是生物最重点也是难点的一块,在整个生物中这一块比较活,解遗传题目灵活性比较高!你如果要想学透彻的话一定要找生物老师给你讲解一下,你可以和他讲明你的情况!估计这一块下的工夫比较大!做题目的话最好是做那些以前的高考题和模拟试题,但是没学透彻的话估计那些题目对你来说比较困难!做遗传分析题目的时候千万不能卡住在一个地方,然后就去看下答案!这样绝对提高不了!学了生物感觉时间紧迫，又不敢放松，总感觉耽误了主课的学习！但是别担心，选择好的学习资料只会让你事半功倍！...

2022-12-14

图书名称：《中国分子神经病学》【作者】余元勋等主编【丛书名】中国分子医学系列丛书【页数】576【出版社】合肥：安徽科学技术出版社,2015.08【ISBN号】978-7-5337-6638-2【价格】98.00【分类】分子生物学-神经病学【参考文献】余元勋等主编.中国分子神经病学.合肥：安徽科学技术出版社,2015.08.图书封面：图书目录：《中国分子神经病学》内容提要：本书是医学分子系列中的一部，作者搜集了国内外尤其是国外近年来关于各种神经内科疾病的发病机制、诊断和治疗方面的最新成果，从分子层次上进行了系统的梳理、归纳和阐发，并兼顾中医药方面的诊治方法。全书体例一致，层次清晰。《中国分子神经病学》内容试读第一章钾离子通道与神经疾病一、概论神经细胞信号传递主要是化学信号传递如神经递质与激素，还有快速的电信号沿细胞膜传递等。化学信号传递与电信号传递，都参与离子通道的开关、离子在膜内外的转移，再影响细胞内外的离子的水平与细胞膜电位，细胞膜电位等也能调节离子通道的开关。离子通道的开关很快，但能引发神经细胞几分钟到几小时的生化反应。20世纪后期，膜片钳技术、X射线晶体衍射技术、基因芯片技术、蛋白质芯片技术、蛋白质组学技术、转基因技术、离子通道突变技术等应用于神经细胞电生理学研究后，可直接在神经细胞膜对各种离子通道的离子电流进行测定，从而能在神经细胞上研究各种离子通道的作用。已发现的神经细胞的离子电流有：I、IcrL(Ic常被细胞质高水平钙离子引发，能促进复极化)、IW、IK、IKa、IKr、Io、IKAC、IKAP、IKP、IKG、IK、Ii、Ia、IaC、Ium、I、IAHP、IK(常被强的去极化而引发，能促进复极化)、IA、IM(对乙酰胆碱敏感，可被去极化而引发)、Ik(促进到达静息膜电位)、I等。离子通道(iochael)是一类跨细胞膜糖蛋白，常由多个亚单位组成水溶性离子通过的孔道。一些离子通道家族成员常有相似的组成、结构（如电压门控钙离子通道家族，常有一段跨膜片段区)、开关功能、对离子的选择性；离子通道开放时，离子流动的方式是被动扩散（从膜的高离子水平侧，穿膜流向低离子水平侧)，能沟通细胞膜两侧的离子，允许离子在化学梯度下，以10？个离子/秒的速度通过，使不能随意跨膜转运的亲水性离子，能经离子通道进行跨膜转运。离子通道有离子通过的选择性与门控性，离子通道内有离子选择性通过相关结构与门控结构。在神经细胞处于静息态时，神经细胞膜的钾离子通道对钾离子的通透性，比钠离子通道对钠离子的通透性大100倍，易排出钾离子：而在神经细胞兴奋态时，钠离子通道对钠离子的通透性，比钾离子通道对钾离子的通透性大15倍，钠离子易进人神经细胞。钠离子在神经细胞内的水平为10mmol/L,在神经细胞外的水平为130mmol/L钾离子在神经细胞内的水平为150mmol/L,在神经细胞外的水平为5mmol/L氯离子在神经细胞内的水平为4mmol/L,在神经细胞外的水平为120mmol/L。研究发现，离子在溶液中的体积半径比在晶体中的大，钠离子的半径为0.95埃，钾离子的半径为1.33埃。各种离子通道参与各种神经细胞的细胞膜电位变化与兴奋性变化。通过离子的孔道常由多个亚单位组成：孔道的内部常是极性的部分，能与离子相互作用；孔道的外部常是非极性的部分，能与细胞的膜结构相互作用。离子通道激活、开放后，主要产生细胞生物电现象、形成细胞膜电位的改变、参与动作电位的发生、决定生物电兴奋性的高低、参与信号转导、调节细胞质钙离子水平、调节血管的收缩与舒张、调控神经突触传递与递质释放。接受递质的细胞膜上，常有递质门控离子通道，如乙酰胆碱门控钾离子通道K、Y-氨基丁酸门控氯离子通道、谷氨酸门控NMDA受体阳离子通道，可调节腺体分泌与肌肉运动、参与学习与记忆、调节细胞内外环境、维持细胞正常体积与形态等。目前应用膜片钳技术、荧光探针钙图像分析技术、分子克隆技术、基因突变技术等，对神经细胞的离子通道已有较多的认识。离子通道基因突变可引发神经系统的离子通道病。离子通道可分为门控离子通道与非门控离子通道。非门控离子通道常一直开放着，一般产生细胞的背景膜电流、形成静息膜电位。门控离子通道，能不断从关闭状态(R状态)经抑制/失活状态(I状态，使细胞处于不应期)到开放状态(O状态)，再从开放状态经抑制/失活状态到关闭状态。中国分子神经病学细胞膜电位的改变，可调节离子通道的活动，各种细胞外物质的水平改变、细胞内信号通路活性的改变，也可调节离子通道的活动；离子通道的活动，又可反馈性调节细胞膜电位、细胞外各种物质的水平、细胞内信号通路的活性水平。在神经细胞处于静息态时，门控离子通道常被抑制、关闭：门控离子通道可根据控制通道开关的信号刺激的不同，而分为三种：一是电压门控离子通道（如K,、Na,、Ca,、CLC),通道开/关主要受细胞膜电位高/低调控，离子通道分子内α亚单位跨膜片段区的S4域，常为电压感受器。二是化学（配体）门控离子通道，这种离子通道常有配体结合位点，常为多种阳离子的非选择性通道，配体门控离子通道有：细胞外配体门控离子通道，如神经递质Y-氨基丁酸受体/甘氨酸受体的阴离子通道、5-HT受体/乙酰胆碱受体/谷氨酸受体/NMDA受体/AMPA受体/KA受体的阳离子通道；还有细胞内配体门控离子通道，如KAP(K6.0)、囊性纤维化跨膜电导调控因子(CFTR)、ROMK(钾离子通道K1.O)、三磷酸肌醇受体-钙离子通道、兰尼碱受体-钙离子通道、EaC、ASIC、SK钾离子通道、BK钾离子通道、钠-氢交换体、CRAC、P2X等的离子通道。三是机械（牵拉）门控离子通道，如VRAC、KCNK、CLIC、容量调节离子通道等，常有离子选择性通道与非离子选择性通道。离子通道对离子有选择性，钠离子通道对钠离子的选择性一般比非离子通道的高12倍，钙离子通道对钙离子的选择性比非离子通道的高1000倍。神经细胞膜等的离子通道中，已发现α、β、Y、6亚单位，一般以α亚单位为功能性亚单位，最重要，常以几个α亚单位围成离子通过的孔道；3亚单位等为调节α亚单位功能的亚单位。神经细胞的钠离子通道、钾离子通道、钙离子通道的α亚单位的分子结构较相似。钾离子通道一般有4个α亚单位、4个B亚单位；钠离子通道一般有4个α亚单位及一些B亚单位；钙离子通道一般有α、B、Y、6亚单位；但CI-通道一般有2个亚单位。离子通道功能明显改变可导致折返机制、触发性活动等，能引发心律失常：也可引发神经细胞功能改变。神经细胞膜内外的钾离子水平不同，细胞膜内外的钾离子平衡后的膜电位即是Eκ；在膜内外的钾离子不平衡时，细胞膜电位为Ek=(一58mV)log1o(细胞外钾离子水平/细胞内钾离子水平)。细胞外钾离子水平/细胞内钾离子水平的比值为10时，细胞膜电位为一58V。研究发现，改变一个神经细胞的膜电位需要的钾离子很少，约为8×10-1”mol的钾离子。二、钾离子通道大多数细胞同时表达几种钾离子通道，各有不同的钾离子电导、门控性质、功能、药理特性，有十多类（乃至上百种），广泛分布，作用较复杂，对细胞膜动作电位的形状、时程有较大的影响，能调节细胞的多种功能。神经细胞的存活与正常调节钾离子通道开关、形成细胞膜正常负性电位（内负外正)相关。神经细胞内的阳离子主要是钾离子，钾离子通道是神经细胞基本的离子通道。一些中枢神经细胞膜有被细胞内高水平ATP抑制、关闭的Km通道；细胞产能水平能调节神经细胞的兴奋性。下丘脑腹侧正中核的神经细胞与胰岛3细胞相似，对血葡萄糖水平敏感，高血糖能抑制、关闭神经细胞膜KP通道，使钙离子通道开放，神经细胞去极化（易活化）。钾离子通过的孔道内，有一定的氨基酸残基的基序（钾离子孔道的外1/3是选择性过滤器），故能使钾离子选择性通过（使钾离子选择性通过的能力比使钠离子选择性通过的能力高1000倍)，产生的钾离子外向电流，是神经细胞动作电位复极的主要离子电流，也参与去极化等。目前已知的钾离子通道，按表达钾离子通道的基因可分为：电压门控型钾离子通道(K,通道、基因突变可引发肢体抖动)、钙离子激活的钾离子通道(K通道)、内向整流钾离子通道(K通道)双孔钾离子通道(K即通道，弱整流型钾离子通道)等；按活动性质可分为：有可失活型钾离子通道及无失活型钾离子通道。钾离子通道兴奋后的失活机制，有N端失活机制（球-链失活机制：N末端球状结构由内侧堵塞钾离子通过的孔道)、C端失活机制(C端的S5域、S6域变化，堵塞钾离子第一章钾离子通道与神经疾病通过的孔道的外侧P孔)。完全抑制细胞膜中钾离子通道后，细胞膜去极化后只引发门控钙离子电流。电压门控钾离子通道，是由4个α亚单位和4个B亚单位及一些辅助分子等组成的大复合体(跨膜糖蛋白)。α亚单位结合细胞膜，电压门控钾离子通道的功能主要由α亚单位决定，一般有一个6跨膜片段区(a亚单位为6TM/IP型)，如KCNA基因编码的K,1、KCNH1基因编码的K10.1、KCNN1基因编码的Kc2.1,跨膜片段区都含S1域~S6域，S5域-P区（有39个氨基酸残基)-S6域组成钾离子孔道，S4域是细胞膜电压感受器，受细胞膜电压门控。内向整流钾离子通道有4个α亚单位和4个B亚单位，每个α亚单位有1个2跨膜片段区(2TM/1P型，如KCNJ基因编码的K.1.1,跨膜片段区含TM1域、TM2域，TM1域-P区-TM2域组成钾离子孔道，不含电压感受器，因此是非电压门控型钾离子通道)，如I的钾离子通道、IKAm的钾离子通道、IKAC,的钾离子通道；有一些钾离子通道的a亚单位有1个11跨膜片段区(a亚单位为11TM/1P型，如KCNM基因编码的Kca1.1,跨膜片段区含S1域~S11域)。双孔道钾离子通道有2个α亚单位和2个3亚单位，每个α亚单位有2个串联的2跨膜片段区(2个a亚单位共含TM1域、TM2域、TM3域、TM4域)，2个a亚单位的TM1域-P区-TM2域、TM3-P区-TM2域组成钾离子孔道(a亚单位为2TM/2P型，如KCNK1基因编码的K2P1,不含电压感受器，因此是非电压门控型钾离子通道)。从钾离子通道的特性，可分为激活慢/失活慢型、激活快/失活快型。电压门控型钾离子通道与钠离子通道/钙离子通道，有相似的α亚单位，但门控机制不同。围成钾离子孔道的外1/3部分，是选择性钾离子过滤器，有结合4个钾离子的结合位点（该位点有T-V-G-Y-G-D氨基酸残基基序)，能选择性使钾离子通过；细胞质内低钾时，选择性过滤器变构失活，能使排出钾离子减慢；选择性过滤器构型活化、开放后，可使钾离子易通过、排出。选择性过滤器结构不同，常决定钾离子通道是细胞膜电压正比依赖型或整流型，多数钾离子通道电流为整流电流，即在钾离子通道完全开放时的钾离子电流大小，与细胞膜电位的关系常稍偏离线性关系。S4域是电压感受器，在去极化时的细胞膜电压作用下S4域能移动，改变构象，可使钾离子通道活化、开放。钾离子孔道的外侧部分的TM域-P区-TM域等形成P环，能调控通过钾离子。α亚单位还有N端区/C端区（常在细胞内），N端区有100~300个氨基酸残基(aa),N末端的20个氨基酸残基，形成带正电荷的球状结构，在阻断钾离子通道时，可参与钾离子通道的N型失活（门控的球一链机制)。钾离子通道α亚单位N端区的功能包括：一是几个α亚单位的N末端的内侧能形成钾离子孔道。K,通道的钾离子孔道由a亚单位的内侧的S5域-P区-S6域形成P环；K通道的钾离子孔道由a亚单位的内侧的TM1域-P区-TM2域形成P环；K2P1通道的钾离子孔道由a亚单位的内侧的TM1域-P区-TM2域及TM3域-P区-TM4域形成两个P环。二是钾离子通道开放一定时间后，N末端的球状结构能由内侧堵塞钾离子通过的孔道。钾离子通道C端区有400个氨基酸残基(a),其中有蛋白激酶C的作用位点，蛋白激酶C能促进钾离子通道的C端区磷酸化，能使钾离子通道P环关闭。a亚单位的mRNA有剪切可变性，能使钾离子通道产生多样性。研究发现，钾离子孔道包括：一是孔道内口、孔道外口，孔道外口形成P环。二是孔道腔，外1/3是钾离子选择性过滤器，钾离子选择性过滤器有钾离子结合的氨基酸残基基序，能使钾离子与水一起通过。研究还发现，由α亚单位形成的选择性过滤器的不同，引发的钾离子通道的电流可分为：一是电压门控型钾离子通道电流，如延迟整流钾离子通道电流(IK)、瞬时外向整流钾离子通道电流(I。)、超速整流钾离子通道电流(IKm)、内向整流钾离子通道电流(IK)等；二是钙离子激活的钾离子通道电流，如IKC等；三是双孔钾离子通道背景电流，如IK2P等。钾离子通道的3亚单位能调节α亚单位功能、稳定钾离子通道，分为两类，一类无跨膜域，在细中国分子神经病学胞内；另一类有跨膜域，在细胞膜。（图1-1）亚家族人类基因表型NCNIHCN超极化激活1非选择性阳CNGICNG环核苷酸门控了离子通道HERGKCNH电压门控ethera-go-g06TM一aktlPlatiwardrectifier2kIParameciummloKCNM高电导Ca2激活SK1KCNN小、中电导Ca2激活、K.1.1KCNA电压门控haker-K3.1KCNC电压门控hawK4.1KCND电压门控halK2.1KCNB电压门控ha电压门控以外〉延迟整流K5.1K6.1-K8.1K9.1KCNSKCNOIKCNO电压门控KCNO5}慢延迟整流K4.1K7.1,经典的内K.1.1。内向整液向整流2TMK2.1KCNHK5.K6.1,ATP敏感K8.1)G蛋白耦联4TMTWIKKCNK2个P区钾漏电流通道图1-1钾离子通道的亚型钾离子通道开放时，细胞内高水平(158mol/L)的钾离子易外流，使细胞膜超极化，能减少细胞膜的钠离子通道与钙离子通道的开放度，使动作电位时程缩短，减少细胞质中的钠离子、钙离子，降低细胞兴奋性。钾离子电流是心肌细胞、神经细胞动作电位复极的主要电流，除0相去极化期外，钾离子电流在动作电位其他各期中都有重要作用。多种血管舒张药物，能通过活化、开放钾离子通道，使细胞膜电位超极化，导致细胞膜L型电压门控钙通道关闭，钙离子流入减少，细胞质钙离子水平降低，可使血管舒张，增加血流量。钾离子通道受抑制而关闭一些时，钾离子排出时间延长，细胞动作电位时程和不应期延长，使细胞膜去极化，能增加细胞膜的钠离子通道与钙离子通道的开放度，提高细胞质中的钠离子与钙离子的水平，提高细胞兴奋性。钾离子通道总的可分为有失活与无失活两类。三、电压门控钾通道电压门控钾通道(voltage-gatedK+chael,K,通道，a亚单位是K,)已发现至少50种，是一类主要受细胞膜电压调节的钾离子通道的总称，能建立、维持细胞膜电位；电压门控钾离子通道关闭时，能促使细胞膜去极化而使细胞兴奋；电压门控钾离子通道开放时，能使细胞膜超极化而使细胞抑制电压门控钾通道，广泛存在于许多种细胞的细胞膜，参与细胞生物电冲动的发放等；电压门控钾通道在细胞膜去极化后激活、开放，先形成外向钾离子电流；当细胞膜电位到达一65mV时，电压门控钾通道开始快速失活，在细胞膜复极后，电压门控钾离子通道关闭；电压门控钾离子通道开放度减小、开放的时间较长时，细胞膜动作电位时程延长。电压门控钾通道包括延迟外向整流钾通道即IK(DR)通道、瞬时外向钾通道即I。通道、缓慢失第一章钾离子通道与神经疾病5活的延迟外向钾通道即IK(D)通道、乙酰胆碱敏感的钾通道即Ik(M)通道、钙离子激活的钾通道等。电压门控钾离子通道a亚单位已发现K,1~K,4(分别由KCNA~KCNG基因编码)，K,1还分K,1.1~K1.8(由KCNA1KCNA8基因编码)，K2还分K2.1~K,2.3,K3还分K3.1K3.4,K.4还分K.4.1K4.3等。（图1-2）神经细胞电压门控钾离子通道主要由4个独立的α亚单位与4个独立的B亚单位组成。α亚单位跨膜片段区的各个跨膜片段域，由膜外连接肽链及胞内连接肽链相连，N-末端和C一末端均在细胞内，S1域~S3域有带负电荷的酸性氨基酸残基；S4域有5个带正电荷的碱性氨基酸残基，是电压感受器。电压门控钾离子通道激活时，S4域位移并引发S5域、S6域变构打开P环，使K通道活化、开放，钾离子外流。P环在电压门控钾离子通道的外口的最狭窄处，决定对钾离子通透性的大小；P环易结合药物等，存在选择性电压门控钾离子通道阻断剂4-氨基吡啶(4-AP)的结合、作用位点，4一氨基吡啶结合钾离子通道的P环后，能阻断钾离子外向电流。电压门控钾离子通道的钾离子孔道内有T-V-G-Y-G-D氨基酸残基的基序，可选择性一次通过一个钾离子。几乎所有的电压门控钾离子通道(Ik通道除外)的S6域都含P-X-P氨基酸残基基序(X为任意氨基酸残基)，使S6域活化后，可增宽电压门控K+通道的P环内径，促进通道开放。但Ik通道缺少P-X-P氨基酸残基基序，使其P环内径的变化范围较小。电压门控钾离子通道的B亚单位(K,B~4)能调节α亚单位功能，可调节通道门控动力学特性和功能，3亚单位分子量40~45kD,有300~400个氨基酸残基。电压门控钾离子通道的3亚单位为胞质蛋白，其C端与α亚单位的N端相连（以4：4的比例），参与组成电压门控钾离子通道的细胞质段。B亚单位的功能包括：一是能增加α亚单位在细胞膜的表达量；二是可加快通道N-型失活和减慢通道C-型失活；三是能增加通道对电压的敏感性；四是有些电压门控钾离子通道的3亚单位本身还是功能性还原酶，能参与通道的氧化还原调节。电压门控钾离子通道的开放和关闭，主要受细胞膜电压的调控。细胞膜去极化后膜电压升高，能很快激活电压门控钾离子通道开放，使钾离子外流产生1K电流。电压门控钾离子通道的电流包括Ik、IKC、I。等。在电压门控钾离子通道持续激活后，其开放状态不能长久维持，通道钾离子外流能力逐渐下降。细胞膜复极化后膜电压降低，使电压门控钾离子通道很快失活、关闭。电压门控K+通道失活可分快、慢两种：快失活通常在几毫秒内完成，一些电压门控钾离子通道存在N-型快失活，如K,1.1、K,1.7、K,4.2、K4.3等，N-型失活的前提，是电压门控钾离子通道在激活、开放状态。C-型快失活能使电压门控钾离子通道构象改变，而很快失活。慢失活几乎见于所有的电压门控钾离子通道，慢失活主要由电压门控钾离子通道P环外口阻断所致，如在TEA/TEAK与P环外口的某些位点结合时及钾离子选择器被非通透离子如C、Ba2+等占据时等。M受体激动剂卡巴胆碱可激活蛋白激酶C,而磷酸化特异性氨基酸残基、阻断P环外口、关闭K,1.2钾离子通道。高水平表皮生长因子，经表皮生长因子受体、蛋白激酶C也能抑制、阻断K,1.2钾离子通道。高水平血小板源性生长因子受体、成纤维细胞生长因子受体，经磷脂酶CY/甘油二酯/蛋白激酶C,能抑制、阻断K,1.5钾离子通道。酸中毒可抑制、阻断K,1.4钾离子通道。神经损伤后，神经元的K,1.1/1.2钾离子通道表达水平下调；活化的蛋白激酶ERK能磷酸化抑制、关闭K,4.2钾离子通道；钾离子通道关闭后，能使电压门控钾离子通道的电流减小，可增加神经元对疼痛的敏感性，易引发疼痛。蛋白激酶A能使K,钾离子通道的Sr5,21磷酸化，去除N型失活，能使失活电流改为钾离子外向电流，能增加电压门控钾离子通道的电流。吗啡、乙醇、氧化型震颤素、巴氯酚、可乐定、尼古丁、WTN55、212-2能激活、开放电压门控钾离6中国分子神经病学K.5.1[KCNF1,2251-K2.1[KCNB1,20q13]LK.2.2[KCNB2,8q12]6.1KCNG1.20g10-K.6.2KCNG2.10g22K,6.3[KCNG3,221]K.8.1[KCNF3.2q22]K,9.3[KCNB3.224]K3.4KCNC4,121]-K,9.2[KCNF2,222]K,3.2[KCNC2,10g13]-K.9.1KCNF1,2012K,3.1[KCNC1,1114]K3.3[KCNC3.10g13-K4.1[KCNDI,Xl1]厂K4.2KCND2,7q31]K4.3[KCND3,ll3]K1.7KCNA7,19g13]-K.1.4[KCNA4.1114]K1.6KCNA6,1213]K,1.5[KCNA5.1213]-K1.6K1.10.19g13]-K1.2[KCNA2,113]K1.1KCNA1,1211K1.3KCNA3,121]K7.1[KVLOTI.KCNQ1.1115]K7.2KCNQ2,20g13]K7.3KNCQ2,8g24]K7.5[KCNQ5.6g14K7.4[KCNQ4.134K,12.2[EIK2,KCNH3,12q13]一K12.1[EIK-13一K.12.3EIK-3.KCNH14,17q21]K.10.1[KCNH1,1q32]K10.2KCNH5,14g24-K.11.1[HERG1.KGNH2,7q25]-K11.2HERG2.17刀K.11.3[HERG3,2]图1-2电压门控钾离子通道家族子通道等而止痛。编码K,1.1钾离子通道的KCNA1基因突变，可导致发作性共济失调1型(EA1)。(表1-1)表1~1电压门控钾离子通道基因的突变与神经系统疾病通道基因亚型突变所致神经系统疾病KCNAI家族性发作性共济失调I型或伴有肌肉抽搐的发作性共济失调KCNQ2良性家族性新生儿惊厥I型/肌肉抽搐综合征KCNQ3良性家族性新生儿惊厥Ⅱ型KCNQ4非综合征性的感音性耳聋Ⅱ型···试读结束···...

2022-09-07 图书 分子生物学就业前景 分子生物学 书籍

图书名称：《分子病理与精准诊断》【作者】卞修武编著【丛书名】精准医学出版工程【页数】583【出版社】上海：上海交通大学出版社,2018【ISBN号】978-7-313-20483-7【价格】188.00【分类】分子生物学-病理学-诊断学【参考文献】卞修武编著.分子病理与精准诊断.上海：上海交通大学出版社,2018.图书封面：分子病理与精准诊断》内容提要：本书为精准医学出版工程精准诊断系列丛书之一。本书对分子病理的基本概念、原理、技术方法及其在精准诊断中的应用进行了详细阐述，包括运用分子和遗传学方法对肿瘤进行诊断和分类，设计和验证对治疗反应和病情发展的预测性生物标记物，不同的基因构成造成的对肿瘤的个人易感性，还有环境因素和生活方式对肿瘤发生的影响等。《分子病理与精准诊断》内容试读第一篇总论人们财迪拉品共单一业上海的所名认识.分子下，1”分子高理实幽蜜塞本夏实言的总设求方分业得面行西味向州色价作时刚险家所和的有的卫水行四家段家是个华化学检海质体的，但正欧贵政见导中现，有烟的以线过效工明食源隆顶步奥何认了业哈员定见松始风票分车物学的长5通上：月坐业的卫可能学所标可门中心的台路证。人拉分子病理实验室建设与管理随着人们对遗传病、传染病及肿瘤的发生发展机制、诊治方法的研究认识，分子病理学已经成为病理学发展的重要方向。不论从基础病理研究还是临床病理诊断，以分子生物遗传学技术与传统病理学技术相结合的分子病理学技术得到了临床病理医师和科研人员的广泛应用。随着分子病理诊断技术日趋成熟以及疾病个体化治疗的发展，分子病理诊断已越来越多地应用于临床。分子病理诊断主要是指基于疾病组织和细胞等标本的分子遗传学检测，用于协助病理诊断和分型、指导靶向治疗、预测治疗反应及判断预后等。为了确保分子病理检测结果的准确性和可信度，如何设置分子病理实验室，并对其进行标准化管理，如何有效地利用实验室资源，确保实验室工作有序进行，为临床医生提供可靠的试验结果，亦成为分子病理试验发展建设的重点。1.1分子病理实验室基本要求实验室的总体设计与要求应参考《分子病理诊断实验室建设指南（试行）》、《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》)、IS015189:2003《医学实验室质量和能力的专用要求》、《临床分子病理实验室二代基因测序检测专家共识》、《个体化医学检测质量保证指南》、《肿瘤个体化治疗检测技术指南》、《个体化医学检测实验室管理办法》进行。另外还有美国病理医师学院(CAP)制定的医学实验室认可标准，虽未得到国际认可体系的承认，但在欧美及亚洲等一些发达国家中开展较为广泛，具有相当的权威性。1.1.1分子病理实验室人员资质要求人员数量和结构配制合理，分工明确。选择通过资质考核的人员，定期进行专业培训和考核。检测技术人员应具备临床病理学、分子生物学的相关专业大专以上学历，并经过相关技术的理论与技能培训合格，同时具有临检中心颁发的相应合格证。数据分析人员003分子病理与精准诊断应具有临床医学、分子生物学或遗传学知识背景并经生物信息学培训。最终报告应由中级或硕士以上具有病理学背景、经培训合格的本单位执业医师或者授权签字人（高级职称或医学博士学位)审核。1.1.2检测实验室的区域设置要求布局合理，有明确的分区。保证温度、湿度、亮度、洁净程度符合实验室基本要求。各实验室工作区空气及人员流向需要严格按照相应准则配置。工作区间设有试剂物品传递专用窗，做到人物分流。各工作区配备不同的工作服及专用的仪器设备，严格控制交叉污染的发生。分区可根据实际情况合并，但是在进行第二代测序(NGS)检测的前处理和建库时，血液样本与组织样本分开。1.1.3检测试剂及项目要求试剂和检测平台应选择中国食品药品监督管理总局(CFDA)认可产品。涉及实验室自配试剂，应该有严格的试剂制备标准操作规程(SOP),需经过临床实验室自建项目(LDT)验证合格才可使用。每次取用试剂，使用者需要进行登记记录，试剂应严格按照试剂使用说明书的要求保存，并定期检查试剂的有效期及库存量，决定是否需要采购更换试剂。开展项目应为“全国医疗服务价格项目规范”中列入的项目，以及经当地权威机构技术准入评估后开展的项目。此外，至少开展1项分子病理检测项目，每年检测量不少于100例。1.1.4检测实验室的质量管理要求实验过程中每个环节均需要建立实验室质量管理体系文件和SOP及机器运行和维护SOP,具有严格的室内质控措施；定期参加室间质评，以及有持续的质量保证和改进计划。1.2分子病理实验室运行规范1.2.1建立标准化病理标本处理规范1.2.1.1实验前明确每种分子病理检查所需的标本要求分子病理实验室常用的临床标本主要包括石蜡组织、新鲜组织、脱落细胞、全血及其他体液等，对于不同检测项目，需要明确可使用的样本类型。对分子病理检测而言，检测对象通常为核酸，样本的前处理（包括采集、处理、保存）是否得当尤其重要。如手术标本离体后要及时取材并用中性福尔马林固定，固定时间一般为4h~6h,最长不超0041分子病理实验室建设与管理过24，以避免因固定时间不足或过长影响组织结构完整性或破坏组织抗原，造成FISH等试验结果不理想。淋巴瘤基因重排检测用的骨髓血样本必须用EDTA抗凝，4℃保存：HPV检测的宫颈脱落细胞样本一经采集应尽快送检，一般室温保存不超过12h,4℃保存不超过7天，一20℃保存不超过3个月。又如qRT-PCR实验对样本的要求是新鲜组织必须尽快地进行去RNA酶处理或置液氮冻存，防止RNA降解而致检测失败。1.2.1.2严格核对信息、明确标本接受及拒绝标准。实验人员收到样本后由接收人进行签名确认，核对检测申请单，包括患者的个人基本信息、临床诊断、申请检测项目、实验室收到样本的日期和时间等。保证其编号与送检样本编号一致，严防标记错误。对样本信息不详或标记有误、不符合检测要求的样本及因采样不当造成的严重溶血样本一律视为不合格样本，及时通知采样人员或申请检测医师要求重新采样，作好相应记录并保存该样本。如果接受了不合格样本，在检测报告的结果中应注明情况。实验人员对所有的样本进行规范化编号，根据样本类型采取相应的方式进行保存，并在规定的时间内完成检测。石蜡标本切片厚度控制在4~6，切片数量依组织大小而定。样本质量对检测结果和分析至关重要，病理医师需要对可评估的样本进一步明确病理诊断，并评价标本有无出血、坏死和不利于核酸检测的前处理（例如含HC1脱钙液处理），病变细胞（如肿瘤细胞)的总量和比例，避免假阴性。进行NGS检测前需通过病理诊断明确其肿瘤的性质及含量，根据不同肿瘤类型选择合适的基因ael测序。组织标本中肿瘤细胞含量建议达到20%以上，低于此标准可富集后检测。未经病理评估的基因检测结果不可单独用于分子病理临床诊断目的。1.2.2建立标准化实验操作流程不论是采用国际或国家标准中发布的，或由权威技术组织指定的方法，还是用自己新设计开发的非标准方法，或经扩充和优化修改过的标准方法时，实验室应根据检测项目的原理、使用范围、检测灵敏度和特异性对检测方法进行确认。并通过与其他方法进行比对，获得客观数据，从而确定各项检测的标准操作流程，如免疫组织化学检测标准操作流程、荧光原位杂交检测标准操作流程、PCR实验室标准操作流程、NGS标准操作流程等。每一项分子病理检测都有相应标准操作程序，检测时，阴性对照样本、阳性对照样品必须和待测样本同时进入实验过程，以保证检测结果的准确性。实验人员必须严格按照相应的SOP进行操作，运行程序不得随意更改。1.2.3检测结果解读及报告在判断结果时，应先对各种检测结果做出定性判断，然后进行分析，避免一些非特005分子病理与精准诊断异性荧光信号及染色对结果分析的干扰。对于肿瘤ael基因NGS测序数据，鉴定后的变异位点都需要进行该位点可视化查看和确认。结果报告必须简单清楚，对于特殊的检测结果可以适当注释并解读。PC℉定性检测报告“阳性”“阴性”即可。免疫组化结果判读主要根据肿瘤细胞的目的区域DAB染色深浅及着色细胞百分比，各抗体判断标准不尽相同，根据相应的最新版指南或参考文献进行结果判读。报告可以常规病理报告的形式发放，也可以补发病理报告的形式发放，全部以纸质和电子的形式保存。结果解读要客观平实的描述，NGS报告中对于疾病相关性只描述既往研究中的疗效或预测，不能出现使用何种治疗手段或策略的语言。报告内容及格式如图1-1所示。(检测单位名称)(检测单位通讯地址)(检测单位1og0)(检测单位联系方式)基因突变检测报告检测编号：检测项目：检测目的：姓名：性别：年龄：手术医院：手术方式：送检标本取材部位：取材日期：病理号：送检者：送检日期：病案号：病理诊断：肿痛细胞含量：《占X鸡检测区域组织内细形目的相关基因突变检测结果：基因名称检测区域突变状态©NM改变蛋白改变己批准药物(参考转录本)钴果解读：(突变位点的测序深度：突变频率：突变与该疾病治疗及烦后的关系：参考指南及相关文献)备注(对该样本质量的评价及检测平台的适用范围进行说明)检测方法：(本检测采用的检测平台、检测试剂盒、检测内容)检测人：分析人：复核人：报告日期：图1-1实体瘤二代测序基因突变检测报告参考模板006···试读结束···...

2022-08-26 卞修武教授 卞修武简介

图书名称：《临床精准分子诊断学》【作者】府伟灵【丛书名】精准医学出版工程【页数】453【出版社】上海：上海交通大学出版社,2020.05【ISBN号】978-7-313-20480-6【价格】248.00【分类】分子生物学-实验室诊断【参考文献】府伟灵.临床精准分子诊断学.上海：上海交通大学出版社,2020.05.图书封面：分子诊断学》内容提要：《临床精准分子诊断学》内容试读绪论精准医学是精确诊断和个体化治疗的结合，是21世纪医学发展的重要方向。随着分子生物学技术的发展，越来越多的致病基因被定位，与人类生理、病理以及药物代谢过程相关的基因多态性被揭示，疾病发生的遗传学基础得以阐明，医学模式也逐渐由“经验医学”“循证医学”向个体化的“精准医学”转变。分子诊断(moleculardiagoi)是精准医学的基石，是个体化医疗得以实现的核心技术。它是以DNA、RNA或蛋白质分子为诊断材料，通过分子生物学方法检查人体内源基因或外源（病原体）基因的存在、缺陷或表达异常，对人体状态或疾病做出特异性诊断的方法或过程。1961年，Hall建立的液相分子杂交法标志着人类掌握了通过分子生物学技术对特定核酸序列进行检测的方法，开启了对疾病进行分子诊断的大门。1983年，Mulli提出的聚合酶链反应(olymeraechaireactio,PCR)概念，更是给分子诊断技术插上了基因扩增的翅膀，大大提高了基因检测技术的敏感度与特异性，降低了分子诊断的技术门槛。近20年来，随着人类基因组计划及后基因组计划的完成和实施，以及以生物芯片、第二代基因测序技术为代表的高通量基因检测技术的进步，分子诊断已进入临床精准分子诊断学(cliicalreciiomoleculardiagotic)时代，并为精准医学提供了坚实的技术手段。1.1临床精准分子诊断学的概念、形成与发展1.1.1临床精准分子诊断学的概念临床精准分子诊断学是一门以临床疾病的预防、诊断和治疗为目的，应用分子生物学技术如分子杂交、核酸扩增、生物芯片、第二代基因测序等，从分子水平对个体基因组、转录组、蛋白质组及代谢组等进行分析，从而获得人体生物大分子及其体系的结构或表达调控变化水平，为疾病风险预测、早期诊断、分子分型、治疗方案制订、疗效考察以及预后判断等提供信息和个体化决策依据的一门学科。它在感染性疾病、遗传性疾病、肿瘤、个性化用药、移植配型和法医物证鉴定等多个医学领域中都得到广泛的应用，001临床精准分子诊断学并产生了巨大的作用。这门学科在生命科学发展中的重要价值注定它必将成为21世纪主导临床检验诊断技术的一门新兴学科。1.1.2临床精准分子诊断学的形成与发展随着临床分子诊断技术的出现和不断发展，人类对生命科学的研究从宏观层面深入到微观层面，逐渐开始从分子遗传和表达上深刻理解疾病和机体的相互关系，认识各种疾病的易感因素、发病机制、预后转归等与个体之间的复杂关系，从而提出了精准诊断和个体化治疗的科学性和必要性，并提出了“精准医学”的概念。分子诊断技术在临床医学中的不断发展和广泛应用为精准医学的诞生奠定了技术基础，而精准医学的发展又为分子诊断技术赋予了历史使命。将先进的临床分子诊断技术与现代精准医学指导思想相结合，临床精准分子诊断学应运而生。因此，临床精准分子诊断学的形成与发展是人类对生命科学不断深入探究和理解，医学模式不断转变和完善，分子诊断技术不断创新和突破的过程。1.1.2.1医学模式和医学观念的转变和发展远古时代，人们认为世间的一切都是超自然的，人类的健康与疾病、生存与死亡都由无处不在的神灵掌控，这是人类最早对疾病与健康的认识，即神灵主义的医学模式。随着生产力的发展以及人类对自然认识能力的不断提高，人类开始用自然哲学理论解释疾病与健康，如中国的《内经》和被尊称为“医学之父”的希腊名医希波克拉底的研究成果，他们将疾病和健康与外界环境以及心理活动联系起来进行观察和思考，形成了自然哲学的医学模式。15世纪，一些生物医学基础科学，如生理学、病理学、免疫学、药理学等不断完善和发展，这些自然科学的系列发现促使人们开始运用生物医学的观点认识各种生命现象，并认为健康是人体、环境与病因三者之间的一种平衡关系。这种维持生态平衡的医学观所形成的医学模式即是生物-医学模式。随着对疾病认识的深入，人们发现一些与人的心理和精神状态有关的疾病，如心脑血管疾病、神经精神疾病、肿瘤等，已经成为人类健康的主要危害。然而，曾经的生物-医学模式对此却不能做出较好的解释。这是因为疾病本身并非只是由生物学因素所导致，而是由生物学因素、社会因素和（或）心理因素的共同作用所导致。于是，出现了综合生物、心理、社会因素对人类疾病与健康影响的更加完善的医学观，即生物-心理-社会医学模式。随着医学模式的不断发展和转变，临床医学行为也由过去的经验医学向循证医学发展，并走到了现在的精准医学时代。在20世纪80年代以前，临床实践大多以经验和推论为基础，教科书提供的知识、上级和同行医生的经验教训以及个人临床医疗实践经验是医疗决策的主要依据。这种经验医学模式具有一定的片面性和盲目性。例如，硝苯地平等第一代短效二氢吡啶类钙拮抗剂曾被经验性地广泛用于治疗高血压，甚至被推广用于治疗急性心肌梗死、不稳定型心绞痛和心力衰竭。直到90年代中期人们才在0021绪论循证医学理念指导下，采用病例-对照研究和荟萃(meta)分析方法发现与利尿剂和B受体阻滞剂相比较，硝苯地平等第一代钙拮抗剂虽能有效降低血压，但可能增加患者发生心肌梗死和死亡的风险，剂量越大这种风险的增加越明显，从而否定了短效二氢吡啶类钙拮抗剂在急性心肌梗死等心血管疾病中的应用。经验医学更多以经验为基础，以疾病和医生为中心，根据药物对生理指标的作用推论其疗效，其证据获得是基于小样本、短时间的验证，没有对患者进行长期的随访，忽略了患者的最终结局。随着医学的进步，越来越多的临床证据暴露了经验医学的局限性，循证医学的理论体系和研究方法便逐渐形成和发展起来，并成为临床决策遵循的主要原则。1992年，DavidSackett教授及其同事，在长期临床流行病学实践的基础上正式提出了循证医学的概念，并在2000年几经修正将其定义为：“慎重、准确和明智地应用当前所能获得的最好的研究依据，同时结合临床医生的个人专业技能和多年临床经验，并考虑患者的价值和愿望，将三者完美结合制订出患者的治疗措施”。其核心思想就是在临床医疗实践中，应尽量以客观的科学研究结果为证据，制订患者的诊治决策，将最好的证据应用于临床实践2)。遵循证据是循证医学的本质所在，而可靠的证据则是循证医学的基石。依据质量和可靠程度不同证据分为五级：1级为荟萃分析；2级为样本量足够的随机对照研究；3级为设有对照但未用随机方法的研究；4级为无对照组的系统病例观察；5级为专家意见。其中1级可信度最高，5级可信度最低3)。临床医生可根据证据级别的不同，慎重地做出临床决策。但循证医学理论体系本身仍存在缺陷和不足，它并不能完全弥补基础医学和临床实践之间的鸿沟，通过群体研究所获得的证据难以解决临床工作中针对个体患者进行临床决策时面临的特殊性。因此，学者们尝试改变思维方式，重新思考疾病的本质，尝试结合包括基因组学、蛋白质组学、表观遗传学和细胞信号转导等最新生命科学领域的基础研究结果，在大数据框架下寻找产生疾病的驱动因子和根本因素，对疾病进行更加科学的分类和诊断，从而克服目前循证医学证据获得过程中的某些缺陷，实现对疾病的精准诊断、精准评估，以达到对疾病的精准预防及治疗。由此，精准医学诞生了。精准医学概念源于美国，是顺应时代和科技发展需求所产生的医学概念。美国国立卫生研究院(NatioalItituteofHealth,NIH)公布的精准医学概念为：建立在了解个体基因、环境以及生活方式基础上的新兴的疾病预防和治疗方法。我国的精准医学概念含义相对更广，狭义的概念是基于个体患者遗传学信息进行个性化疾病预防、诊断和治疗的学科；广义的概念是综合各种疾病诊疗技术和影响因素，进行疾病诊断和精准分类，以实现个性化精准干预的学科。虽然精准医学目前尚处于初级阶段，但已显示出在临床治疗决策方面的优越性。例如，肿瘤化学治疗（化疗）药物曲妥珠单抗（赫赛汀)在乳腺癌患者中的应用。曲妥珠单抗是人类表皮生长因子受体2(HER2)的人源单克隆抗体，可作用于乳腺癌细胞的HER2受体，干扰乳腺癌细胞的生物学反应，导致乳腺癌细胞死亡。在乳腺癌患者中HER2过度表达者约为15%，这些患者的预后较其他003临床精准分子诊断学乳腺癌患者差，但对曲妥珠单抗治疗的反应良好，因此，HER2的表达水平可作为临床医生制订治疗方案的重要依据。这比运用循证医学理念通过群体研究获得的证据对个体患者的临床决策有更强的针对性。精准医学与循证医学的长期目标一致，都是为了更好地评估疾病对患者个体的风险，预测疾病的最佳临床干预手段和治疗方法，但相对于循证医学，精准医学更侧重于理解疾病的深层产生机制，注重患者分子水平的个体化差异，把人群分为亚群，更具针对性，是临床决策认识上的新飞跃。1.1.2.2临床精准分子诊断学的形成和发展临床精准分子诊断学的形成源于分子诊断技术的发展。分子诊断技术中的核酸分子杂交技术、核酸扩增技术、生物芯片技术、基因测序技术作为该领域发展的里程碑，分别代表了分子诊断技术发展经历的四个阶段。1975年，Ka等用cDNA/DNA液相分子杂交技术研究羊水成纤维细胞的a-珠蛋白基因，证明α-地中海贫血HH病患者的a-珠蛋白基因数目只有正常人的1/4，而巴氏胎儿水肿综合征胎儿完全无α-珠蛋白基因)，并于1976年正式应用该技术诊断胎儿α-地中海贫血。1976年，美籍华裔科学家简悦威等应用液相DNA分子杂交技术成功地在分子水平上诊断了镰状细胞贫血。这是临床分子诊断学发展的第一阶段，即通过核酸分子杂交技术对遗传性疾病进行分子诊断。1985年，美国PE-Cetu公司人类遗传研究室的凯利·穆利斯(KaryMulli)等发明了具有划时代意义的PCR技术，使人们梦寐以求的体外无限扩增核酸片段的愿望成为现实。PCR技术可在体外短时间内将1个或几个特异性DNA片段扩增到百万数量级，被誉为生命科学中的“革命性”技术。20世纪90年代后期建立了适合于临床疾病诊断的实时荧光定量PCR(real-timequatitativePCR,qPCR)技术，这是临床分子诊断学发展的第二阶段。PCR技术灵敏度高、操作便捷，但是通量不高。1991年，Affymetrix公司的Fodor博士组织半导体专家和分子生物学专家共同利用光蚀刻技术研制出首个以玻片为载体的微阵列，并在次年对通过原位合成制备的DNA芯片进行了首次报道8。这是世界上第1块基因芯片，标志着生物芯片正式成为可实际应用的分子生物学技术。生物芯片一般指高密度固定在介质表面的生物信息分子（如基因片段、蛋白质或多肽、组织细胞等）的微阵列，阵列中每个分子的序列及位置都是预先设定的已知点阵。生物芯片根据生物分子间相互作用的原理，将生物化学分析过程集成于芯片表面，从而实现对DNA、RNA、多肽、蛋白质以及其他生物成分准确、快速、高通量检测，这使临床分子诊断学的发展跨入第三阶段。l975年英国生物化学家弗雷德里克·桑格(FrederickSager).等发明的双脱氧链终止法(Sager法)和l977年美国生物化学家阿伦·马克萨姆(AllaMaxam)和沃尔特·吉尔伯特(WalterGilert)发明的化学降解法9.o开启了基因测序的征程，在此基础上发展起来的各种基因测序技术统称为第一代基因测序技术。随着人类基因组计划的完成，深度测序和重复测序等大规模基因组测序的需求催生了第二代基因测序技术，即0041绪论“下一代基因测序”或“高通量基因测序”，其可实现对几十万甚至几百万序列进行大规模平行检测，具有并行性高、操作简单、成本低等优势。因为第二代基因测序技术无法绕过PCR扩增环节，且读长很短，给后期的序列组装带来了巨大的压力，所以以单分子测序技术为基础的第三代基因测序技术应运而生。与前两代相比，第三代基因测序技术最大的特点是单分子测序，即在单个细胞、单分子水平上对基因组进行测序四，因其采用单分子读取技术，有着更快的数据读取速度和巨大的应用潜能，不再需要P℃R扩增步骤，进一步降低了测序的成本。基因测序作为直接获得核酸序列信息的唯一技术手段，是分子诊断技术的一个重要分支。第二代基因测序技术在无创产前检测(oivaivereataltetig,NIPT)、遗传性肿瘤筛查及肿瘤个体化用药指导等方面的应用则是临床分子诊断学发展的第四阶段。以上分子生物学技术各具特点，在发展的过程中不断改进，并结合发展，如今均在分子诊断的不同领域发挥着重要作用。核酸分子杂交技术发展最为迅猛的20年是20世纪60一80年代，由于当时尚无法对样本中靶基因进行人为扩增，人们只能通过已知基因序列的探针对靶序列进行捕获检测。该技术从1961年Hll等的工作开始，衍生出许多相关技术，其中最重要的是荧光原位杂交(fluorececeiituhyridizatio,FISH)技术。该技术可对异常基因进行定位分析，目前仍广泛应用于临床染色体异常的检测。PCR技术问世后，在研究和应用过程中不断得到发展和创新，衍生出的新形式最为丰富，如反转录PCR、多重PCR、巢式PCR、qPCR、数字PCR等多种PCR技术，并迅速渗透至分子生物学的各个领域，其中qPCR在临床上最为常用，而数字PCR的准确性较高。目前PCR广泛应用于感染性疾病、遗传性疾病、肿瘤的临床诊断中。虽然分子杂交、定量PCR等技术在近几年已得到长足的发展，但对基于特定基因序列检测的分子诊断，基因测序仍是技术上的“金标准”。基因测序可获得最微观且最海量的个人基因信息档案，揭秘个体基因密码，成为精准医学的核心支撑技术。生物芯片的诞生，以其高通量快速检测的特点打破了传统生物检测技术的瓶颈，得到了广泛的应用和长足的发展。利用生物芯片技术可自动、快速地检测出成千上万个基因的表达情况，通过对比健康DNA图谱和疾病DNA图谱得出病变DNA的信息，分析用药前后机体的不同组织、器官基因表达的差异，从而达到基因诊断、药物筛选、个体化治疗等目的，如聋哑基因的检查、结核分枝杆菌耐药基因的检测、肿瘤标志物的检测等。除此之外，流式细胞术、色谱质谱联用技术、生物传感器技术、太赫兹光谱技术、拉曼光谱技术等分子生物学技术也快速发展并逐渐推广开来。分子生物学技术的快速发展让精准分子诊断成为可能，在精准医学理念的引领下精准分子诊断得到快速发展，使人们从传统的宏观疾病诊断模式向微观分子诊断模式转变，并逐渐走向个体化精准医疗。临床精准分子诊断学的提出就是基于精准医学的要求，希望充分利用分子生物学技术手段实现临床疾病的精准预防、诊断、治疗和评估。005临床精准分子诊断学但现状是，仅2%~6.4%的癌症患者有靶向治疗药物针对的基因突变；估计仅有1.5%的复发和难治性实体癌患者能从精准癌症医学中获益。导致精准癌症医学治疗不够理想的原因包括现有的靶向治疗药物大多数只能部分阻断细胞增殖途径、同一患者的癌细胞具有异质性等21)。因此，精准分子诊断学的发展还任重而道远1.2临床精准分子诊断学与精准医疗临床精准分子诊断学是实现精准医疗的保障，目前广泛应用于疾病的预测预防、早期诊断和分型、个体化治疗以及预后评估等疾病发生与发展的各个环节中，使现代医疗模式不再束缚于疾病表象的分析，苦于无法透过现象看本质，而是可以直面疾病的本质，并从疾病本质出发对其进行有目的的干预或治疗，从而实现预防疾病发生、进行个体化治疗和疗效评估的精准分析和诊疗。1.2.1临床精准分子诊断学在疾病预测、预防中的应用临床精准分子诊断学对疾病的预测、预防常应用于遗传性疾病中。遗传性疾病是指由遗传物质发生改变引起的或者是由致病基因控制的疾病，常为先天性的，也可后天发病，具有终身性和亲代向后代遗传的特征，严重影响患者的生活质量。目前，能够分类的遗传性疾病已有数千种，在美国国家生物技术信息中心(NCBI)在线人类孟德尔遗传数据库(OlieMedeliaIheritaceiMa,OMM)中几乎囊括了所有目前已发现的遗传性疾病基因，这些伟大的发现为人类有效避免遗传性疾病带来的各种危害奠定了基础，也带来了希望。绝大多数遗传性疾病都无切实有效的治疗措施，对于重者在产前明确诊断后采取终止妊娠措施是唯一有效的处理方式，如先天性软骨发育不全、马方综合征；对于轻者可以对症治疗，提前干预，提高患儿生存质量和寿命，如对于苯丙酮尿症患儿，可通过基因筛查进行早期诊断，有效控制食物中苯丙氨酸的含量，在保证满足患儿生长发育的条件下减轻脑损害，有望使患儿智力和身体发育都恢复到接近正常水平。很多遗传性疾病在出生一定时间后才发病，有的要经过几年、十几年甚至几十年后才能出现明显症状。通过精准分子诊断技术从基因的角度筛查遗传性疾病，以尽早采取干预措施，改善患者生活质量，延长患者生命，减轻患者家庭经济和精神负担，甚至通过产前基因诊断的方式，避免严重遗传性疾病患儿的出生，并通过家系遗传性疾病基因的检查，指导优生优育。从这个角度来讲，临床精准分子诊断对遗传性疾病的预测、预防和产前筛查具有重要的意义。1.2.2临床精准分子诊断学在疾病早期诊断和分型中的应用临床精准分子诊断学在感染性疾病的早期诊断和分型中的应用较好地弥补了传统006···试读结束···...

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图书名称：《分子影像与精准诊断》【作者】汪联辉，宋春元，吴江编著【丛书名】精准医学出版工程【页数】307【出版社】上海：上海交通大学出版社,2020.01【ISBN号】978-7-313-20481-3【价格】168.00【分类】影像诊断【参考文献】汪联辉，宋春元，吴江编著.分子影像与精准诊断.上海：上海交通大学出版社,2020.01.图书封面：分子影像与精准诊断》内容提要：本书以作者所在团队近年的研究成果为基础，系统阐述了近年来发展迅速的磁共振、放射性核素、光学、超声、光声、多模态等分子影像原理与技术，讨论了分子影像在精准诊断方面的应用、发展趋势及其存在的挑战。《分子影像与精准诊断》内容试读分子影像与精准诊断概述分子影像(molecularimagig,MI)是分子医学的重要组成部分，在基础医学研究中占有十分重要的地位，也是基础研究成果转化到临床应用的重要桥梁。精准医学更新了传统医学模式的观念，代表着当今医学的发展方向。精准医学包含了精准诊断和精准治疗，而精准诊断是精准治疗的基础。本章对分子影像、精准医学及精准诊断进行简要介绍。1.1分子影像概述1.1.1分子影像的起源和发展历史分子影像最早起源于核医学，其历史可以追溯到核医学发展之初。核医学早在20世纪70年代初就开展了特异性的靶点成像。1974年，Goldeerg等)在种植GW-39肿瘤的仓鼠体内，利用放射性核素标记的IgG对肿瘤进行扫描定位。20世纪90年代中期，核医学研究人员利用分子生物学的研究成果，进一步拓展了分子成像的研究范围。1996年，Tjuvajev等使用放射性核素标记胸腺嘧啶核苷类似物进行单光子发射计算机断层显像监测HSV1-k基因在大鼠体内的表达。20世纪末，随着物理学、电子学、计算机科学的快速发展，影像学相关的成像设备和图像处理技术等也取得了长足的进步，这使得分子成像研究不仅仅局限在核医学，而是迅速拓展到磁共振、光学等其他影像学领域1.1.2分子影像学的定义1999年9月，美国哈佛大学的Weileder等影像学界权威在密西西比州召开国际影像学会议。与会专家达成共识，认为一门新的学科一分子影像学已经出现，这标志着分子影像学的诞生。2002年在美国波士顿召开的第一届世界分子影像学大会上，分子影像学的概念由Weileder正式提出，即应用影像学方法对活体状态下的生物过程001分子影像与精准诊断进行细胞和分子水平的定性、定量研究。Weileder同时提出了“分子影像四要素”：①具有高度特异性和亲和力的分子影像探针；②分子影像探针能克服生物屏障进入靶器官和细胞；③适度扩增（化学或生物）的方法；④敏感、快速、高清晰度的成像技术。2007年6月在华盛顿召开的美国核医学年会上，与会专家对分子影像学做了进一步定义，即分子影像学是在分子和细胞水平上对人或其他活体的生物学过程进行可视化、特征化的测量，在成像的同时进行实时定量研究。新的定义增加了对生物学过程的特征性描述，同时强调了实时成像，使分子影像的概念更加全面和准确。但定义的研究内容和研究范围仍然不够具体，对那些不具备“分子影像四要素”的成像技术是否属于分子影像依然存在争议。有学者认为，应将具备“分子影像四要素”的分子成像技术列为狭义的分子影像，将符合分子影像学新定义，但不具备“分子影像四要素”的分子成像技术列为广义的分子影像列1.1.3分子影像的特点20世纪生命科学的快速发展为分子影像的产生和形成奠定了基础，将医学影像学与现代分子生物学、生物化学等相互融合形成了分子影像学这一新兴交叉学科。分子影像是当今医学影像研究的热点，也代表着医学影像的未来和发展方向。传统影像主要提供解剖学方面的信息，只能显示疾病后期的形态学改变，而分子影像聚焦于疾病初始状态下的基因、分子、蛋白质等异常。也就是说，分子影像捕捉的是疾病发生、发展的本质变化，而不是疾病发展到后期所表现出来的组织、器官形态改变，因而，早期发现疾病是分子影像的一大特点。而且，分子影像是基于活体内与疾病发生、发展密切相关的标志物进行的成像，可根据标志物的特异性对疾病做出准确判断，因而利用分子影像诊断疾病更准确。此外，分子影像还能对同一活体进行实时、动态成像，监测疾病发展过程中基因、分子、蛋白质等发生的改变，并针对这些改变及时对疾病的治疗效果进行评估，因而利用分子影像监测疾病的发展和评价疗效具有精确、及时的特点。1.1.4分子影像探针分子影像探针与成像靶，点（如受体、酶、抗原、核酸等）的特异性结合是分子影像的重要环节之一，同时借助分子影像设备对决定疾病发展的关键靶点进行成像。根据分子影像设备的不同，分子影像探针分为放射性核素探针、磁共振(mageticreoace,.MR)探针、超声探针、光学探针、光声探针等。分子影像探针的研发是分子影像发展过程中的关键之一，包括靶点的筛选、靶分子的合成、靶分子的影像学标记和靶向亲和力检测等。靶点的选择一般针对决定疾病发展进程的某些关键分子。通过筛选与靶点特异性结合的靶分子，利用化学合成或生物合成的方法合成该靶分子，选择放射性核素、荧光等影像学标记物，应用放射化学技术或生物分子链接技术对靶分子进行影像学标0021分子影像与精准诊断概述记，利用靶分子具有在靶点特异性聚集的特征，通过分子影像设备对靶点进行成像（见图1-1)。探针合成后需对其靶向性、亲和力等进行验证，并研究其在体内的生物学分布特征和药物代谢动力学特征。分子影像探针的研发是推动分子影像学发展的最大动力，加快分子影像探针从基础实验研究向临床应用的转化是当前分子影像发展的重要任务。分子影像设备分子影像探针影像学标记物靶分子前形的啊MMMMM靶点通果调音面细胞图1-1分子影像探针构成及其成像原理1.1.5~分子影像成像技术目前，分子影像成像技术主要包括放射性核素显像(radiouclideimagig,RI,即核医学显像)、磁共振成像(mageticreoaceimagig,MRI)、超声成像(ultraoicimagig,UI)、光学成像(oticalimagig,OD、光声成像(hotoacouticimagig,PAI)以及多种影像结合的多模态成像。放射性核素显像是应用最早、最广泛的分子影像技术，也是目前临床应用最成熟的分子影像技术。放射性核素（核医学）分子影像主要包括单光子发射计算机断层显像(iglehotoemiiocomutedtomograhy,SPECT)和正电子发射断层显像(oitroemiiotomograhy,PET)。PET采用符合探测技术在体外探测18F、1C等正电子核素经湮没辐射产生的双向Y光子，经计算机等进一步处理获得活体器官的003分子影像与精准诊断断层图像，并可绝对定量评价体内的生物学改变。PET的空间分辨率和敏感性明显高于SPECT。PET代表着当今核医学分子影像的最高水平，具有更广阔的发展前景。此外，PET使用的许多正电子核素（如8F、1C、13N、5O等）是人体组成的固有元素，用这些核素标记生物活性分子不会改变标记分子的生物特征和功能，标记合成的分子探针更具有生理性，能更客观、更准确地显示人体的生物学信息。因此，PET分子影像技术在分子影像学中具有极其重要的地位。总的来说，放射性核素分子影像具有敏感性高、可定量分析等优点，但也存在空间分辨率不够高、假阳性率高、解剖定位准确性差等不足MRI无射线辐射，空间分辨率高，可多序列、多参数成像。MR分子影像利用MR成像技术并借助磁共振对比剂的生化特征直接或间接显示生物体内靶点的情况。此外，弥散成像、灌注成像、功能成像、波谱成像等均能显示活体状态分子水平的微观运动情况，也属于广义的分子影像。弥散成像着重反映水分子的扩散运动，通过设定不同的值改变水分子扩散运动的自由度，从而显示组织间水分子扩散程度的差异。灌注成像分析血流从动脉进入毛细血管网然后汇入静脉这一过程，通过反映组织的血流动力学评估组织的活力和功能。功能成像是基于氧合血红蛋白和去氧血红蛋白的比例发生改变导致磁化率改变而进行的成像，已广泛应用于中枢神经系统。波谱成像是基于组织细胞发生病变时，其本身及其周围会出现细胞代谢变化，磁共振波谱成像可监测细胞的这些改变。UI在临床上的应用非常广泛，主要利用超声波的物理特性和器官组织声学性质的差异进行成像。超声分子影像利用超声造影剂与靶，点结合，显示靶点在组织、细胞及分子水平的变化，从而评价正常及病变组织。超声造影剂是超声分子影像发展的重要标志。超声分子影像在成像的同时还可以进行靶向治疗，通过靶向超声微泡携带药物分子，注入血管后与肿瘤等病变的靶点结合，气泡破裂后将药物分子释放，从而实现定点给药。超声分子影像具有操作简单、使用灵活、分辨率较高等优点，但也存在解剖结构分辨差、主观依赖性强等缺点。OI包括荧光成像、生物发光成像、共聚焦成像、相干光学成像、扩散光学成像等，其中荧光成像、生物发光成像应用较多。OI设备简单，成像时间短，而且无射线辐射，敏感性高，价格低，可连续、实时成像，是最早应用于分子生物学研究的成像方法。但OI的穿透力有限，仅达数毫米到数厘米，这是OI在临床研究中应用的最大障碍，目前OI多用于小动物模型研究。PAI是近年来迅速发展的新型分子影像技术，它结合了UI的高空间分辨率和OI的高对比度，可获得反映组织功能和分子信息的高特异性影像。PAI既可依赖组织固有对比（如黑色素、脂肪、血红蛋白等内源性生色团）进行成像，也可利用靶向对比剂增强成像效果。与UI相比，PAI可区分声阻抗相同但光吸收不同的靶标进行功能成像；0041分子影像与精准诊断概述与OI相比，PAI探测的超声信号组织散射较少，可穿透更深的组织。但是，PAI目前仍主要应用于基础实验研究，与SPECT、PET、MRI等相比，PAI不便进行全身成像及深部组织成像，相应的成像理论、扫描条件、数据处理等还需进一步完善和发展。每种成像模式都存在各自的优势和不足，如SPECT、PET敏感性高，但空间分辨率低、解剖定位准确性差；MRI空间分辨率高，但敏感性偏低：UI简便、灵活，但解剖分辨差、过于依赖主观；OI敏感性高、价格低，但穿透力差。将两种或多种成像模式结合的多模态影像能相互补充，克服单一影像模式的不足，充分发挥各自的优势。PAI在一定程度上也是一种多模态影像，它结合了UI和OI的优势。目前，已在临床应用的PETCT(计算机断层扫描，comutedtomograhy,CT)、PET/MRI、SPECT/CT更是多模态影像的典范，如PET/CT的CT部分，不仅能为PET图像衰减校正，还能为PET图像提供高清晰度的解剖定位图像；PET/MRI同时结合了两种分子成像技术，为分子影像的发展提供了更多可能。此外，基于各种分子探针研发的多模态影像如OI/MRI、PAI/MRI、OI/MRI/PET等也已经有陆续报道，多模态成像必然成为分子影像的发展趋势[610。1.2精准医学概述1.2.1精准医学的起源20l1年，美国基因组学家MayardV.Olo在其参与起草的美国国家智库报告《走向精准医学》中正式提出“精准医学”这个名词，即通过遗传关联研究和临床医学紧密接轨，实现人类疾病的精确治疗和有效预警。2012年，Mirezami等在《新英格兰医学杂志》(TheNe心EgladJouralofMedicie)发表文章指出，精准医学就是在合适的时间以合适的剂量给予患者合适的治疗，且确保疗效最好、后遗症最小。美国国立卫生研究院将精准医学定义为一种建立在了解个体基因、环境和生活方式基础上的疾病治疗和预防新方法。2015年1月20日，时任美国总统奥巴马(Oama)在国情咨文演讲中提及“精准医学计划”，他指出这一计划能让每个人都获得自己的基因信息，将使人类更加接近治愈癌症、糖尿病等疾病，“精准医学计划”能更好地守护人类的健康。自此，精准医学的概念受到全世界广泛关注1.12]。1.2.2美国精准医学计划的内容和目标美国精准医学计划的提出主要基于人类基因组测序已经完成、生物分析技术取得长足进步以及大数据应用。该计划大体包括5个方面的内容：①启动百万人基因组计划，重点在于建立一个队列，探索基因、环境和生活方式三者之间的相互作用关系；②寻找引发癌症的遗传因素；③建立评估基因检测的新方法；④制定一系列的相关标准和005分子影像与精准诊断政策，包括伦理学问题；⑤促进政府和市场企业之间的合作。该计划的短期目标是癌症治疗。癌症与基因组破坏累积密切相关。每一种肿瘤都可能有着自身的遗传特点，肿瘤的遗传机制决定了肿瘤的诊断、治疗及相应的疗效评估，针对特异性分子的靶向治疗有些已经取得了很好的疗效。通过分析更多肿瘤基因组可以发现分子诊断新工具，而开发新的治疗需要对临床研究进行新的设计，同时还需要建立数据库平台存储和分享肿瘤的分子和医学数据。美国精准医学计划的长期目标是通过综合分析包括基因组学、分子学、细胞学、临床、行为和环境等在内的多重生物医学信息，开发创新性的诊断和治疗方法，为精准医学奠定科学基础。为此，该计划拟建立一个包括100多万名志愿者的研究队列，在知情同意下采集志愿者的遗传、生物标本、饮食习惯、环境、生活方式、行为学等信息，在保护志愿者隐私的前提下集中全世界的顶尖人才对这些队列数据进行研究，揭示疾病的机制，评估其风险，建立最佳的诊断和治疗方法（见图1-2）-基因构成（遗传因素）信息学独特的病史→患者卫生系统←一诊断个暴露（环境因素】针对人群健康的系统方法人群筛查和预防指南基于个体患者特定风险的特异性诊断实验基于卫生系统的决策支持基于精准诊断的特异性干预措施采用临床研究获得最佳实践为个体患者和人群提供最佳医疗服务图1-2精准医学实施路径(图片修改自参考文献[14们】1.2.3精准医学和传统医疗精准医学也称为精准医疗、精准诊疗，是基于大量患者和健康人群的基因组信息，通过对比分析找到特定疾病的突变位点，针对突变位点提供精准的靶向治疗，并为健康人群提供风险评估和预测。特定疾病的突变位点也是对该疾病进行重新分类的主要依据。同样，在疾病的诊断方面也借助于特异性的分子标志物对疾病进行早期精准诊断。传统医疗主要基于患者的临床症状、体征、实验室检查、传统影像学检查等进行疾病的诊断和分类，治疗往往也是不依赖于个体的“标准化”、“格式化”与“统一化”2006···试读结束···...

2022-08-26 epub百度百科 epub 书

编辑评论：认识分子df电子书是作家王朔的长篇散文。.知分子df内容介绍本书为散文，包含了王朔对文化人和文化的一些看法和看法。王朔是个作家，但他并不是人们想象中的标准主流作家。他有他独特的特点，有他独特的表达文化和文化人的方式。在书中，我们看到了一个睿智、犀利、有责任感的王朔，就像那个小孩子一样，毫无顾忌，戳破了君子的面具。了解分子df作者信息王朔，北京人。1958年出生，1976年高中毕业后加入海军北海舰队担任环卫官。1978年开始创作，1983年辞职从事自由撰稿。1988年加入中国作协。迄今为止，他已出版多部小说和小说，总字数约160万字，其中部分已被改编成电影和电视剧。代表作品《空姐》、《出海》、《半火半海水》、《倔强的主人》、《别把我当人》、《玩就是心跳》、《我《你是爸爸吗》、《长得漂亮》、《和女儿说话》等小说小说广受读者欢迎。认识分子df章节目录我的几个国庆我的文学动机在痛苦和生病中快乐数一数你的想法女孩是怎么练成的什么都没有谣言吃错药引发的爱情把刀放在朋友的肋骨上了解分子灿烂的文明在哪里3月12日观看“说真话”此后一切都会改变游戏规则犹太人的故事我讨厌的话看到王朔看到鲁迅我看到老舍看到金庸了我看的文化太多了，港台文化等等第一个晚上的回忆关于我是谁你害怕吗？再次与×电视台及各类商业媒体对话北京市交通局任何人苏王朔回忆美好的一天榜样的力量是无穷的陈武回忆两三件事有一个老人有很多土地昆明周刊梁佐回忆左束应该是梁佐的悼词崔健印象《王朔文选》序言“看起来很漂亮”的序言前言“他们让我空虚”海燕新作《山之誓言》序言王海都与“国子监之女”我看不出这个人想要什么读绵绵的“糖”儒工天《玩转青春》《英语很疯狂》序言何平旭小鸟测验电影《诗意时代》中的几个配音问题与孙甘露对话《幻想一：网络系列》之一幻想I：网络系列第二部分...

2022-05-12

编者按：2021年高考《细胞分子生物学组成与细胞基本结构》第1部分PDF版今天小编为大家带来了2021年高考分子细胞基本结构第一讲世界版。适用于高三学生生物复习资料，全部免费。没有水印，可以完整打印，需要的可以下载相关内容部分预览细胞分子组成与结构基础知识点整理01细胞的分子组成和结构1蛋白质和核酸的结构和功能(1)蛋白质主要由C、H、O、N4元素组成，很多蛋白质还含有P、S元素，有的还含有微量元素如Fe、Cu、M、I、Z等.(2)氨基酸结构通式的表示方法结构特点是：每个氨基酸分子中至少含有一个氨基和一个羧基，每个氨基和一个羧基连接到同一个碳上原子，并且该碳原子还将氢原子连接到侧链基团。(3)连接两个氨基酸分子的化学键称为肽键。化学式表示为-NH-CO-展开：①丢失的水分子数=肽键数=氨基酸数-肽链数（对于环状肽，肽键数=氨基酸）②蛋白质相对分子质量=平均氨基酸相对分子质量×氨基酸数-丢失水分子数×水相对分子质量③一条肽链至少有1个游离氨基和1个游离羧基，有肽链中至少有一个游离氨基和一个游离羧基。R基团中还可以有氨基和羧基。(4)蛋白质结构多样化的原因是：构成不同蛋白质的氨基酸数量不同，当氨基酸形成肽链时，不同类型氨基酸的排列顺序千变万化，以及肽链的卷曲，折叠方式及其形成的空间结构千差万别。蛋白质多样性的根本原因是基因中碱基排列的多样性。(5)有些蛋白质是细胞和生物体的结构成分，如结构蛋白；一些蛋白质具有催化功能，如胃蛋白酶；一些蛋白质具有运输载体的功能，如血红蛋白；有些蛋白质起到信息传递的作用，可以调节人体的生命活动，如胰岛素；一些蛋白质具有免疫功能，例如抗体。(6)核酸的元素组成为C、H、O、N和P。核酸是细胞内携带遗传信息的物质，在生物体的遗传、突变和蛋白质生物合成中起重要作用。(7)核酸的基本单位是核苷酸，一个核苷酸由一分子含氮碱基、一分子五碳糖和一分子磷酸组成。(8)DNA中的五碳糖为脱氧核糖，RNA中的五碳糖为核糖；DNA中的碱基是腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶和胸腺嘧啶，而RNA中的碱基是腺嘌呤，鸟嘌呤、胞嘧啶和尿嘧啶；DNA包含两条脱氧核苷酸链，而RNA仅包含一条核糖核苷酸链。(9)生物的遗传物质是核酸。展开：①由于大多数生物体以DNA为遗传物质，只有RNA病毒以RNA为遗传物质，那么DNA是主要遗传物质吗？②真核生物，原核生物的遗传物质是DNA。DNA病毒的遗传物质是DNA，RNA病毒的遗传物质是RNA。④真核细胞中所含的RNA不是遗传物质，DNA是遗传物质。⑤细胞质中的遗传物质是DNA。2碳水化合物和脂质的种类和功能(10)构成糖的化学元素是C、H、O。(11)葡萄糖是细胞生命活动所需的主要能量物质；核糖是核糖核苷酸的组成部分；脱氧核糖是脱氧核苷酸的成分。(12)碳水化合物的主要功能是主要的能量物质。(13)植物细胞特有的单糖为果糖，特有的二糖为麦芽糖和蔗糖，特有的多糖为淀粉和纤维；动物细胞特有的二糖是乳糖，特有的多糖是糖原。(14)构成脂质的元素主要是C、H、O，有些脂质还含有P和N。(15)脂肪是细胞内良好的储能物质，也是良好的隔热体。分布在内脏周围的脂肪还具有缓冲和减压的作用，可以保护内脏。磷脂是细胞膜和各种细胞器膜的重要成分。(16)类固醇包括胆固醇、性激素和维生素D。(17)构成细胞膜的脂质是磷脂和胆固醇。(18)因为等量的脂肪氧化分解比碳水化合物释放更多的能量，所以说脂肪是动物细胞中很好的能量储存材料3水和无机盐的作用(19)细胞鲜重中含量最多的化合物是水，细胞干重中含量最多的化合物是蛋白质。(20)结合水是细胞结构的重要组成部分。游离水是细胞中的良好溶剂；细胞中的许多生化反应都需要水参与；多细胞生物中的绝大多数细胞必须在水基液体环境中浸润；生物体内的水流可以运输营养物质和代谢废物。(21)结合水/游离水的比例越小，有利于适应性代谢活性的增强。膨胀：①种子成熟时结合水/游离水的比例变大，发芽时结合水/游离水的比例变小。②游离水与结合水的比例决定了细胞或生物体的代谢强度。比例越大，新陈代谢越强，反之亦然。一般比值越大，电阻越差，比值越小。抵抗力越强。(22)多种无机盐对维持细胞和生物体的生命活动具有重要作用；无机盐离子必须保持一定的量，这对维持细胞的酸碱平衡非常重要。扩展：ATP、核苷酸等物质的合成需要磷酸。(23)构成细胞的最基本元素是C，基本元素是C、H、O、N，主要元素是C、H、O、N、P、S，还有大量的元素为C、H、O、N、P、S、K、Ca、Mg，微量元素为Fe、M、Z、Cu、B、Mo。(24)这些化合物在活细胞中的含量和比例不断变化，但保持相对稳定，以保证细胞生命活动的正常进行。02细胞结构和功能1细胞学说的建立过程(1)细胞学说的创始人是施莱登和施万。(2)细胞学说的主要观点是：细胞是有机体，一切动植物都是从细胞发展而来的，都是由细胞和细胞产物组成的；一个细胞是一个相对独立的单元，有自己的生命，它又与其他细胞一起作用于整体的生命；新细胞可以从旧细胞中产生。(3)细胞学说的创立对生物进化的重要意义在于它揭示了所有的动植物都是由细胞组成的，从而表明动植物之间存在一定的遗传关系，并且生物之间的遗传关系对于揭示生物进化具有重要价值。2种细胞(4)自然界中生命系统的层次包括：细胞、组织、器官、系统、个体、种群、群落、生态系统和生物圈。(5)植物的生命系统层次没有“系统”层次。(6)原核细胞（如细菌、蓝藻等）与真核细胞（如酵母、动物细胞、植物细胞）的本质区别在于有无以核膜为界的细胞核.扩增：①原核细胞除核糖外无其他细胞器。细菌等原核生物细胞壁的主要成分是由碳水化合物和蛋白质组成的化合物。②原核生物的遗传不符合孟德尔遗传规律；在真核生物的有性生殖过程中，核基因的遗传符合孟德尔遗传规律。③在自然条件下，原核生物的遗传变异类型仅为基因突变；真核生物的遗传变异类型包括基因突变、基因重组和染色体变异。④细菌等原核细胞以二元分裂为主；真核细胞通过有丝分裂、无丝分裂和减数分裂进行分裂。(7)病毒不能独立生存，病毒的代谢和繁殖过程只能在宿主的活细胞中进行。引申：①病毒在分类学上既不是原核生物也不是真核生物。②每个病毒核酸的基本单位是四个脱氧核苷酸，或四个核糖核苷酸。③病毒的培养不能直接用培养基培养，因为病毒的繁殖必须在宿主的活细胞中进行。3.细胞膜系统的结构与功能(8)以哺乳动物成熟红细胞为实验材料，可分离纯细胞膜。将细胞放入干净的水中，水会进入细胞，使细胞膨胀，细胞内的物质流出，从而得到纯净的细胞膜。(9)细胞膜主要由脂类和蛋白质组成，还有少量碳水化合物。扩张：①发挥细胞膜功能，控制物质进出的物质为载体。②细胞膜和其他生物膜的化学成分大致相同，但在不同的生物膜中，化学物质的含量是不同的。例如，细胞膜上的碳水化合物含量相对高于细胞器膜。(10)细胞膜的结构特征是流动性，功能特征是选择性渗透性。(11)在细胞膜的外面，有一层由细胞膜上的蛋白质与糖结合形成的糖蛋白层，称为糖被。糖与细胞表面识别密切相关。消化道和呼吸道上皮细胞表面的糖蛋白具有保护和润滑作用。(12)植物细胞壁的化学成分主要是纤维素和果胶。展开：①细菌细胞壁的成分是碳水化合物和蛋白质组成的化合物。②常用纤维素酶和果胶酶去除植物细胞壁。三大细胞器的结构和功能(13)比较叶绿体和线粒体在组成、结构、功能和遗传物质方面的差异。(14)线粒体中与有氧呼吸相关的酶分布于线粒体内膜和基质中。扩展：①线粒体中的DNA不与蛋白质结合形成染色体。②线粒体是细胞进行有氧呼吸的主要场所，有氧呼吸的第一阶段发生在细胞质基质中。③进行有氧呼吸的细胞不一定有线粒体，如进行有氧呼吸的细菌。硝化细菌，大肠杆菌(15)与光合作用有关的酶分布在叶绿体中类囊体的膜上和叶绿体基质中。与光合作用有关的色素分布在叶绿体内的类囊体膜上。扩展：①叶绿体中的DNA不与蛋白质结合形成染色体。②叶绿体是真核细胞进行光合作用的唯一场所。③进行光合作用的细胞不一定有叶绿体。例如，蓝藻属于原核生物，可以进行光合作用，但没有叶绿体。(16)内质网是细胞内蛋白质合成和加工以及脂质合成的“车间”。(17)核糖体有的附着于内质网，有的在细胞质中自由分布，是“产蛋白机器”。扩展：①核糖体的功能受生长激素的调节。②游离核糖体合成的蛋白质主要是胞内蛋白质，而附着于内质网的核糖体合成的蛋白质主要是胞外蛋白质（分泌蛋白质）。(18)高尔基体主要是对来自内质网的蛋白质进行加工、分选和包装的“车间”和“发送站”。动物细胞的高尔基体主要与分泌蛋白的加工和运输有关，植物细胞的高尔基体与细胞壁的合成有关。(19)中心体存在于动物和一些低等植物的细胞中，与细胞的有丝分裂有关。(20)液泡由液泡膜和膜内的细胞液组成，细胞液中含有碳水化合物、无机盐、色素和蛋白质等物质。膨胀：①液泡内色素为花青素，胞质呈酸性，呈淡红色，胞质呈碱性，呈蓝色。这会影响植物的颜色。②液泡和叶绿体中色素的成分和功能不同。(21)从以下几个方面注意细胞器的正确分类。①具有双膜结构的细胞器包括：叶绿体和线粒体。具有双膜结构的细胞结构包括叶绿体、线粒体和核膜。②具有单层膜结构的细胞器包括内质网、高尔基体、溶酶体和液泡。具有单层膜结构的细胞结构有内质网、高尔基体、溶酶体、液泡和细胞膜。③没有膜结构的细胞器包括核糖体和中心体。④能产生水的细胞器包括线粒体和核糖体。（还有叶绿体和高尔基体，不需要）⑤与碱基互补配对相关的细胞器包括核糖体、叶绿体和线粒体。⑥含有DNA的细胞器是叶绿体和线粒体。⑦含有RNA的细胞结构是叶绿体、线粒体和核糖体。⑧与细胞能量转换有关的细胞器包括线粒体和叶绿体。(22)分泌的蛋白质最初在内质网上由核糖体中的氨基酸形成肽链。肽链进入内质网进行初步加工后，进入高尔基体进一步加工，形成与细胞膜融合的分泌小泡。,秘密在牢房外。扩张：【内质网以囊泡的形式将蛋白质转运至高尔基体，囊泡与高尔基体膜融合导致高尔基体膜面积增加；进一步修饰和加工的蛋白质以囊泡的形式从高尔基体运输到高尔基体。细胞膜，进而导致高尔基膜面积减小，所以内质网面积逐渐减小，细胞膜面积逐渐增大，高尔基体保持不变](23)构成细胞内生物膜系统的膜结构包括内质网、高尔基体、线粒体、叶绿体、溶酶体等细胞器膜，以及细胞膜和核膜。4细胞核的结构和功能(24)细胞核包括核膜、染色质、核仁和核孔。(25)核膜上的核孔的作用是实现核质之间频繁的物质交换和信息交换。细胞核中的核仁参与某种RNA（rRNA）的合成和核糖体的形成。(26)细胞核是遗传信息的储存库，是细胞代谢和遗传的控制中心。(27)染色质，染色体的化学成分是DNA和蛋白质。染色质和染色体是同一物质在细胞不同阶段的两种存在状态。03细胞代谢1物质进出细胞的方式(1)典型的渗透装置必须具有半透膜。(2)植物细胞的原生质层可视为半透膜，动物细胞的细胞膜可视为半透膜，因此可发生渗透吸水。(3)细胞膜和液泡膜以及两膜之间的细胞质称为原生质层。原生质体是指植物细胞去除细胞壁后的结构。(4)物质跨膜运输的方式包括自由扩散，如氧气和二氧化碳进出细胞膜；辅助扩散，例如葡萄糖穿过红细胞的细胞膜；主动转运，例如跨细胞膜的Na+和K+。(5)自由扩散、辅助扩散和主动转运的区别如下：自由扩散辅助扩散主动运输运送方向沿浓度梯度方向高浓度→低浓度沿浓度梯度方向高浓度→低浓度逆浓度梯度低浓度→高浓度矢量不需要必填必填能源没有消费没有消费消费例子O2、CO2、H2O、N2甘油、乙醇、苯、尿素葡萄糖进入红细胞Na+、K+、Ca2+等离子；小肠吸收葡萄糖和氨基酸膨胀：①溶液中的溶质或气体可以自由扩散，溶液中的溶剂可以渗透；渗透必须满足两个条件：一是有半透膜，二是半透膜两侧的溶液浓度差。(6)细胞通过胞吞作用吸收大分子，通过胞吐作用排出大分子。04酶和ATP1种酶在代谢中的作用(1)酶是由活细胞产生的具有催化功能的有机物质，其中大部分是蛋白质，少数是RNA。(2)酶的生理作用是催化。该酶具有高效性和特异性，酶的作用条件相对温和。扩展：①与无机催化剂相比，酶对活化能的降低更显着​​，因此催化效率更高。②太酸、太碱或温度太高，它会破坏酶的空间结构，使酶永久失活。在低温下，如0℃左右，酶的活性很低，但酶的空间结构是稳定的，在合适的温度下可以提高酶的活性。2ATP在能量代谢中的作用(3)ATP的结构式为A—P～P～P，其中A代表腺苷，T代表三，P代表磷酸基团。(4)ATP和ADP的转化注：①酶的不同：酶1是水解酶，酶2是合成酶；②能源不同：ATP水解释放的能量来自高能磷酸键的化学能，用于生命活动；合成ATP的能量来自呼吸作用或光合作用。③不同的地方：ATP水解在细胞中无处不在。ATP在线粒体、叶绿体和细胞质基质中合成。展开：①动物合成ATP的方式是呼吸作用，植物合成ATP的方式是呼吸作用和光合作用。②细胞内ATP含量不多。③ATP和ADP的相互转化不是可逆反应，因为反应位点和酶不同。05细胞呼吸(1)有氧呼吸是指细胞在氧气的参与下，通过各种酶的催化，将葡萄糖等有机物质完全氧化分解，生成二氧化碳和水，释放能量，生成大量的ATP。引申：①细胞在有氧呼吸过程中最常直接使用的物质是葡萄糖。②有氧呼吸第一阶段的场所是细胞质基质，反应物是葡萄糖，产物是丙酮酸和[H]。③有氧呼吸的第二阶段是线粒体，反应物是丙酮酸和水，产物是CO2和[H]。④有氧呼吸的第三阶段是线粒体，反应物是O2和[H]，产物是H2O。有氧呼吸三个阶段的比较：有氧呼吸过程第一阶段第二阶段第三阶段地点细胞质基质线粒体矩阵线粒体内膜反应物主要是C6H12O6丙酮酸盐+H2O[H]+O2产品丙酮酸+[H]CO2+[H]水释放能量少量少量很多...

2022-05-07 细胞线粒体的功能和作用 细胞线粒体图片

编辑评论：细胞与分子免疫学实验技术主要介绍免疫血清的制备、免疫球蛋白的纯化、标记及应用；免疫细胞的分离技术、免疫荧光染色和流式细胞仪分析、淋巴细胞增殖功能和杀伤功能的测定、细胞因子的生物学活性和免疫学方法的检测；同时简要介绍了生物传感器在免疫学中的应用简介本书全面而具体地介绍了现代细胞和分子免疫学中常用的实验技术。主要包括免疫血清的制备、免疫球蛋白的纯化、标记和应用；免疫细胞分离技术、免疫荧光染色和流式细胞仪分析、淋巴细胞增殖和杀伤功能测定、细胞因子和免疫细胞的生物学活性。同时简要介绍了生物传感器在免疫学中的应用。每种实验技术在简要说明其理论基础的同时，对实验技术步骤、试剂和设备、注意事项等都一一进行了说明。本书适用于免疫学及免疫学相关研究生的实验指导或课题研究，对基础免疫学和临床免疫学的研究也具有参考价值。免疫血清的制备免疫血清的制备是一种常用的免疫学实验技术。高滴度、高特异性免疫血清可作为免疫诊断试剂（如用于制备免疫标记抗体等），也可用于特异性免疫治疗。免疫血清的效价取决于实验动物的免疫反应性和抗原的免疫原性。如果用免疫原性强的抗原刺激高反应体，往往可以获得高滴度的免疫血清；而用免疫原性较弱的抗原进行免疫时，应同时加入佐剂以增强抗原的免疫原性。免疫血清的特异性主要取决于免疫所用抗原的纯度。因此，为了获得高度特异性的免疫血清，必须提前对抗原进行纯化。此外，免疫方案，包括抗原剂量、免疫途径、免疫次数、抗原注射间隔等，也是影响免疫血清效价的重要因素。免疫血清的制备原理具有免疫原性的抗原可刺激相应的B细胞增殖、分化为浆细胞并分泌特异性抗体。由于抗原分子表面的不同抗原决定簇被具有不同特异性的B细胞克隆识别，因此某种抗原刺激机体后产生的抗体实际上是针对抗原分子表面不同抗原决定簇的抗体混合物（即，多个克隆抗体）。此外，由于记忆B细胞和记忆T细胞参与二次反应，抗体产生的特征在于回忆反应。在基础免疫的基础上，反复注射免疫原不仅可以获得高滴度的抗体，同时由于抗体亲和力的成熟，抗体的亲和力可以显着提高。新型免疫佐剂（小鼠用）ImmuoEay的应用佐剂是非特异性免疫增强剂。种类繁多，如卡介苗、脂多糖、氢氧化铝、砚台、矿物油，以及近年来应用的脂质体和CC寡核苷酸等。佐剂主要通过延长抗原在体内（如矿物油和明矾等）的保留时间和非特异性增强机体对特定抗原（如单磷酸盐和CG寡核苷酸）的免疫反应来增强机体对抗原的反应。对抗原的免疫反应。弗氏完全佐剂结合了这两种机制。ImmuEay是一种新型的小鼠免疫佐剂，主要成分是CG寡核苷酸。与传统弗氏佐剂相比，ImmuEay具有高效、安全、使用方便、节省抗原、省时等优点。...

2022-05-07 血清抗原抗体 血清免疫性抗体

编者注：分子克隆实验指南PDF版前两版《分子克隆实验指南》作为分子生物学实验的经典参考书，已被使用了近20年，享有无与伦比的声誉。今天，小编为大家准备了《分子克隆实验指南》第一卷。书籍，下一卷的主编会继续出，大家可以期待简介《分子克隆实验指南（第3版）（套装第2卷和第2卷）》简介：《分子克隆实验指南》前两版因其无与伦比的声誉已经使用了近20年。分子生物学实验的经典参考书。在第三版中，作者对本书内容进行了全面升级，修改了每一个实验方案，添加了大量新材料，拓宽了涵盖的领域。内容丰富详尽，对研究遗传学、分子细胞生物学、发育生物学等有用，对微生物学、神经科学和免疫学等科学具有重要的指导和参考价值。《分子克隆实验指南（第3版）（套装2、2卷）》具有先进、实用、权威的特点，是生命科学实验室当之无愧的“圣经”。《分子克隆实验指南（第3版）（成套第2、2卷）》可供生物、医药卫生、农林畜等领域的科研、教学和技术人员参考畜牧业。相关内容部分预览目录译者顺序[1]第四版前言第1卷第1章DNA分离和定量1引言2方案1通过SDS碱性裂解制备质粒DNA：Mii-Pre9方案2通过SDS碱性制备质粒DNA裂解：大规模制备12方案3从革兰氏阴性细菌（如Ecolz）中分离DNA15方案4乙醇沉淀DNA17方案5异丙醇沉淀DNA21方案6使用微量移液器浓缩器浓缩和脱盐核酸22方案7丁醇提取法浓缩核酸23方案8聚乙二醇沉淀制备Ml3噬菌体单链DNA24方案9Ml3噬菌体电镀27方案10Ml3噬菌体的液体培养30方案11Ml3噬菌体的双链（复制）DNA的制备32方案12使用有机溶剂分离和纯化高分子量DNA35方案13使用蛋白酶K隔离用苯酚从哺乳动物细胞中提取高分子量DNA37方案14从细胞或组织中一步同时提取DNA、RNA和蛋白质43方案15从小鼠尾巴或其他小样本中制备基因组DNA46替代方案：在没有有机溶剂的情况下从小鼠尾巴中分离DNA48替代方案：从小鼠尾巴中分离DNA的单管方法49方案16酵母DNA的快速分离50方案17微凝胶估计DNA数量电泳后使用溴化乙锭(EB)的条带52方案18使用Hoecht33258荧光分析仪估计DNA浓度53方案19使用PicoGree对溶液中的DNA进行定量55信息栏56第2章DNA分析62介绍63方案1琼脂糖凝胶电泳73方案2琼脂糖凝胶中DNA的染色检测76方案3聚丙烯酰胺凝固凝胶电泳80方案4染色检测D聚丙烯酰胺凝胶中的NA85协议5聚丙烯酰胺凝胶中DNA的放射自显影检测86协议6碱性琼脂糖凝胶电泳87附加协议：碱性琼脂糖凝胶的放射自显影90协议7成像：放射自显影和光敏成像91协议8使用玻璃珠从琼脂糖凝胶中回收DNA96协议9从低熔点琼脂糖凝胶中回收DNA：有机溶剂萃取98协议10从聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA片段：粉碎和浸泡法101ltrgt方案11南方印迹103方案12南方印迹：DNA从一个琼脂糖凝胶同时转移到两个膜110方案13使用放射性标记探针对膜固定核酸DNA进行南方杂交112附加方案：洗脱膜探针117信息框119第三章质粒载体克隆与转化122引言123方案1Haaha方法f或感受态大肠杆菌的制备和转化：高效转化策略126方案2Ioue感受态大肠杆菌的制备和转化方法：“超级感受态”细胞131方案3大肠杆菌的简单转化：纳米颗粒-介导转化135替代方案：一步制备感受态大肠杆菌：在同一溶液中转化和储存细菌细胞136方案4通过电穿孔转化大肠杆菌1387L方案5质粒载体克隆：定向克隆143方案6质粒载体克隆：平末端克隆145方案7质粒DNA的去磷酸化148方案8添加磷酸化接头/接头到平末端DNA150方案9克隆PCR产物：扩增DNA末端添加限制性位点151方案10克隆PCR产物：平末端克隆154方案11克隆PCR产物：制作每个T载体157方案12克隆PCR产品：TAcloe159方案13克隆PCR产物：TOPOTA克隆​​161方案14使用X-Gal和IPTG筛选细菌菌落：a-互补165信息栏167第4章Gateway重组克隆205ltrgt简介206方案1扩增Gatewav载体210方案2制备开放阅读框入口克隆和目标克隆213方案3使用多位点LR克隆反应制备目标克隆219信息领域222第5章细菌人工染色体和其他高容量载体的应用223引言224方案1BACDNA的微量分离和PCR检测235方案2BAC的质量制备和线性化DNA238方案3脉冲电场凝胶电泳检测BACDNA的质量和数量241方案4两步BAC工程：制备穿梭载体DNA242方案5同源臂（A-Box）与B同源制备源arm(B-Box)244方案6将A和B同源臂克隆到穿梭载体247方案7重组穿梭载体的制备和测试249方案8将重组穿梭载体转化为感受态BAC宿主电穿孔细胞7L251方案9检查共复合物和筛选重组BAC克隆253方案10一步BAC修饰：质粒制备256方案11制备A同源臂（A-Box)259方案12将A同源臂克隆到报告穿梭载体260方案13用RecA载体转化BAC宿主263方案14将报告载体转移到BACiRecA细胞和筛选共组合265方案15酿酒酵母的生长和DNA制备267方案16酵母DNA的小量制备269信息框270第6章从真核细胞中提取、纯化和分析RNA275引言276方案1来自哺乳动物的总RNAfrom细胞和组织279从小样本中提取RNA的替代方法281方案2斑马鱼胚胎和成虫的总RNA282方案3黑腹果蝇的总RNA283方案4从C中提取总RNA.elega285方案5使用热酸性苯酚从酿酒酵母中提取总RNA287方案6RNA定量和储存289方案7RNA乙醇沉淀295方案8去除RNA样品中的DNA污染通过无RNaeDNaeI处理297方案9用oligo(dT)磁珠提取oly(A)+mRNA298方案10按大小分离RNA：含甲醛的琼脂糖凝胶电泳308方案11分离RNA按分子量大小：尿素变性聚丙烯酰胺凝胶RNA电泳312方案12琼脂糖凝胶固定化中的膜和变性RNA319替代毛细管向下转移323方案13Polyac电转移芳酰胺凝胶和膜固定325方案14Norther杂交327方案15纯化RNA的点和槽杂交330方案16用核酸酶Sl342映射RNA方案17核糖核酸酶保护测定：用核酸酶定位RNARNae和放射性标记RNA探针349方案18引物延伸方法分析RNA355信息框359第7章聚合酶链式反应363简介364方案1基本PCR375方案2热启动PCR380方案3着陆PCR383方案4高GC含量模板的PCR扩增385ltrgt方案5长高保真PCR(LAPCR)390方案6反向PCR393方案7嵌套PCR397方案8扩增mRNA逆转录产物cDNA：两步法RT-PCR400方案9从mRNA的5'端快速扩增序列：5'-RACE409方案10快速扩增mRNA3'端的序列：3'-RACE416Protocol11使用PCR筛选克隆422信息栏424第8章生物信息学431介绍432协议1使用ucc基因组浏览器可视化基因组注释434协议2序列比对和同源性搜索使用BLAST和ClutalW444协议3使用Primer3Plu450进行PCR引物设计协议4使用微阵列和RNA-eq461进行表达序列分析协议5数以亿计的短读取映射到参考基因组472协议6ChIP-eq数据集中富集区域的识别（峰值发现）483协议7顺式调控基序的发现495信息专栏503ltrgt第二卷第9章用Real定量检测DNA和RNA-时间荧光聚合酶链式反应509介绍510方案1优化实时PCR的引物和探针浓度532方案2制备标准曲线537方案3定量实时PCR检测ofDNA540方案4RNA定量实时PCR检测542方案5实时PCR实验数据分析和标准化545信息框550第10章核酸平台技术551简介552方案1印刷微阵列560方案2轮A/轮BDNA扩增564方案3核小体DNA和其他小于T7的500DNA(TIAD)线性扩增(TIAD)567方案4RNA的扩增572方案5用Cvaie-dUTP578直接标记RNA方案6用氨基烯丙基-dUTP58间接标记RNA1方案7用Kleow酶583标记DNA的花青-dCTPrgt协议8DNA的间接标记585协议9在自制微阵列上阻断多聚赖氨酸587协议10微阵列的自制杂交589第11章DNA测序595介绍596协议1通过毛细管测序620制备质粒亚克隆方案2制备通过毛细管测序对PCR产物进行离子化625方案3循环测序反应627方案4全基因组：手动文库准备630方案5全基因组：自动无索引文库准备636附加方案自动文库准备642方案6全基因组：自动索引库制备644方案7制备用于Illumia测序的3k双端文库651方案8制备用于Illumia测序的8k双端文库659其他协议AMPureMageticBeadCaliratio671协议9RNA-Seq：RNA逆转录为cDNA及其扩增673附加协议RNACleaXI'磁珠纯化/RNA-Seqre)679协议10液相外显子组cature680附加方案AMPureXP磁珠纯化688附加方案琼脂糖凝胶大小筛选689方案11自动大小筛选690方案12使用SYBRGree-qP进行文库定量CR693方案13使用PicoGree荧光696进行文库DNA定量方案14文库定量：使用Quit系统700对双链或单链DNA进行荧光定量方案15制备用于454测序的小片段文库702方案16单链DNA文库和emPCR的捕获708方案17Rochei454测序：执行测序运行714方案18结果验证721方案19测序数据质量评估723方案20数据分析724信息框725第12章哺乳动物细胞中的DNA甲基化分析729引言730方案1DNA亚硫酸氢盐测序以检测单个核苷酸的甲基化735方案2特异性DNA甲基化通过甲基化特异性聚合酶链反应检测基因742协议3基于甲基化胞嘧啶DNA甲基化分析技术的免疫沉淀745协议4哺乳动物通过高通量深度测序进行细胞DNA甲基化作图749方案5Roche454亚硫酸氢盐转化DNA文库的克隆测序760方案6亚硫酸氢盐转化DNA文库的Illumia测序765信息框770第13章制备标记的DNA、RNA和寡核苷酸探针775简介776方案1随机引物方法：通过随机寡核苷酸延伸标记纯化的DNA片段792方案2随机引物方法：通过存在的随机寡核苷酸延伸标记DNA798熔化的琼脂糖ltrgt方案3通过切口平移标记DNA探针800方案4通过聚合酶链式反应标记DNA探针804附加方案不对称探针808方案5体外转录合成单链RNA探针针809附加协议通过PCR816将噬菌体编码的RNA聚合酶启动子添加到DNA片段协议6从mRNA随机合成cDNA探针寡核苷酸引物818方案7通过随机寡核苷酸延伸制备放射性标记的消减cDNA探针820方案8用大肠杆菌DNA聚合酶I825的Kleow片段标记双链DNA的3'端方案9使用碱性磷酸盐通过酶对DNA片段进行去磷酸化831方案10含有5'突出羟基末端的DNA分子的磷酸化833方案11去磷酸化平端或5'凹陷DNA分子的磷酸化836方案12寡核苷酸的5'末端用T4多核苷酸激酶839方案13用末端脱氧核苷酸转移酶841标记寡核苷酸的3'末端使用TdT标记的探针843替代性合成非放射性附加方案尾反应843附加协议非放射性标记探针844的合成修饰协议14用KleowF标记合成寡核苷酸大肠杆菌DNA聚合酶片段I845方案15通过乙醇沉淀纯化标记的寡核苷酸849方案16通过尺寸排阻色谱法纯化标记的寡核苷酸850方案17通过Se-PakCl8柱色谱法纯化标记的寡核苷酸寡核苷酸852方案18寡核苷酸探针在水溶液中的杂交：用季铵盐在缓冲液中洗涤854信息框857第14章体外诱变方法871查询872方案1随机诱变使用容易出错的DNA聚合酶879方案2重叠延伸PCR产生插入或缺失诱变890方案3使用双链DNA作为模板的体外诱变：使用DI主体选择突变897方案4突变体B-内酰胺酶选择方法位点诱变904方案5寡核苷酸定向诱变/通过单个限制性位点消除的USE诱变)910Protocol6使用密码子盒插入的饱和诱变915方案7随机扫描诱变922方案8多位点定向诱变926方案9基于PCR的Megarimer诱变930信息框933第15章将基因引入培养的哺乳动物细胞937引言938方案1阳离子脂质试剂介导的DNA转染942使用DOTMA和DOGS转染的替代方案948用于检测B的附加方案单层组织化学染色-半乳糖苷酶950方案2磷酸钙介导的质粒DNA转染真核细胞952替代方案磷酸钙介导的质粒高效DNA转染真核细胞956方案3磷酸钙介导的高分子量转染基因组DNA进入细胞959替代方案磷酸钙介导的贴壁细胞转染962替代方案钙介导的Tra悬浮生长细胞的fectio963方案4DEAE-葡聚糖介导的转染：一种高效转染方法964DEAE-葡聚糖介导的替代转染：增强细胞活力的方案966方案5DNA电穿孔用于转染968协议6通过alamarBlue方法972分析细胞活力协议7通过乳酸脱氢酶方法974分析细胞活力协议8通过MTT方法分析细胞活力977信息框980第16章将基因引入哺乳动物细胞：病毒载体998引言999方案1通过直接克隆构建重组腺病毒基因组1019方案2释放克隆的重组腺病毒基因组以进行拯救和修复扩增1023方案3氯化铯梯度沉降法纯化重组腺病毒1028方案4限制性内切酶消化纯化重组体的鉴定腺病毒基因组1031方案5通过TCID50终点稀释结合qPCR1034测定重组腺病毒感染滴度为qPCR1042制备DNA标准品的附加方案方案6复制能力腺病毒(RCA)的浓缩传代和重新检测1043通过al-TimeqPCR方案7通过瞬时转染制备rAAV1051方案8通过氯化铯梯度沉淀纯化rAAV1054方案9碘克沙醇通过梯度离心纯化rAAV1059方案10肝素亲和色谱法纯化rAAV21062方案11通过阴离子交换柱色谱法从碘克沙醇梯度离心的rAAV样品中富集全包装病毒1065rgt方案12用1068实时定量PCR方法测定rAAV基因组拷贝数ltrgtProtocol13TCID50终点稀释结合qPCR法灵敏测定rAAV染色效价1071方案14通过负染色和高分辨率电子显微镜观察rAAV样品的形态1074方案15通过银染SDS-PAGE分析rAAV纯度1076方案16制备高滴度逆转录病毒和慢病毒载体1079方案17慢病毒载体的滴定1085方案18监测慢病毒载体中具有复制能力的病毒1089信息专栏1091第2卷第17章使用报告基因分析基因表达调控基因系统1102简介1103方案1哺乳期测定动物细胞提取物中的B-半乳糖苷酶1112附加方案检测B-半乳糖苷酶活性的化学发光测定1115方案2单荧光素酶报告基因测定1118方案3双荧光荧光素酶报告基因检测1123方案4通过ELISA定量检测绿色荧光蛋白1128方案5通过Regulati建立细胞系1131g基因表达与四环素附加方案限制稀释法筛选悬浮细胞克隆稳定性1138信息框1140第18章RNA干扰和小RNA分析1170简介1171方案1双链iRNA的制备1185方案2在哺乳动物中通过转染双链iRNA对细胞的RNA干扰1187方案3通过转染双链iRNA1190对果蝇S2细胞的RNA干扰方案4dRNA通过体外转录1192方案5用dRNA浸泡的果蝇S2细胞执行RNAi1196方案6使用dRNA转染在果蝇S2细胞中的RNAi1198方案7小RNA的Norther印迹分析1199方案8小RNA的倒置转录定量PCR分析1203方案9小RNA高通量测序文库的构建1206方案10抑制反义寡核苷酸的制备itmiRNA功能1215协议11哺乳动物细胞中的反义寡核苷酸正义寡核苷酸对miRNA功能的抑制1216协议12果蝇S2细胞中反义寡核苷酸对miRNA功能的抑制1218信息框1219第19章克隆基因表达和靶蛋白纯化和分析1225介绍1226方案1使用IPTG诱导型启动子在大肠杆菌中表达克隆基因1249附加方案用于靶标可溶性表达的小规模蛋白质1255替代方案使用阿拉伯糖BAD启动子在大肠杆菌中表达克隆基因1260替代方案信号肽融合白色1261的亚细胞定位方案2通过杆状病毒表达系统表达克隆基因1265附加方案用于确定杆状病毒原液滴度的吞噬斑块测定1271制备用于转染的杆粒DNA的替代方案昆虫细胞的离子1274方案3使用甲醇诱导型启动子AOX1在毕赤酵母中表达克隆基因1277附加方案酵母培养物1287的冷冻保存方案4制备细胞提取物以纯化可溶性蛋白大肠杆菌1291附加方案酵母细胞珠裂解1296替代方案用于制备大肠杆菌细胞提取物的温和热诱导酶解1298用于制备大肠杆菌细胞提取物的替代方案1300通过组合溶菌酶裂解和冻融方法使用固定化金属亲和层析的方案5多组氨酸标记蛋白的纯化1302附加方案Niz+-NTA树脂的清洗和再生1309替代方案组氨酸标记的快速LC纯化蛋白质1310方案6使用谷胱甘肽通过肽树脂亲和层析纯化融合蛋白1314方案7溶解表达包涵体中的ed蛋白1321方案8蛋白质1325的SDS-PAGE替代方案SDS-PAGE凝固考马斯亮蓝各种凝胶染色方法1335替代方案SDS-PAGE凝胶染色银盐1336方案9蛋白质免疫印迹分析1340方案10测定蛋白质浓度的方法1347信息专栏1353第20章使用交联技术分析染色质结构和功能1358简介1359方案1甲醛交联1369方案2制备用于染色质免疫沉淀的交联染色质1371方案3染色质免疫沉淀(ChIP)1373方案4染色质免疫沉淀沉淀-定量聚合酶链式反应(ChIP-qPCR)1377协议5染色质免疫沉淀-芯片杂交(ChIP-chi)1378协议6染色质免疫沉淀-高通量测序(ChIP-eq)1385协议col7交联细胞3C文库的制备1389方案8环状染色质免疫沉淀（ChIP-loo）文库的制备1393方案9连接产物对照文库的制备1398方案103C中3C连接产物的PCR检测,ChIP-loo和控制库：库滴定和相互作用频率分析1400协议113C、ChIP-loo和控制库的4C分析1404协议12ChIP-loo和控制库的3C、5C分析1408ltrgt信息框1412第21章通过紫外交联免疫沉淀(CLIP)进行体内RNA结合位点图谱(CLIP)1415简介1416协议1优化CLIP实验中免疫沉淀的严格性1424协议2活细胞的紫外交联和裂解物制备1429方案3RNae滴定、免疫沉淀和SDS-PAGE1432方案43'-接头的连接通过SDS-PAGE1441选择大小替代去磷酸化RL3接头的5末端标签1445协议5RNA标签的分离、5连接双接头和逆转录PCR扩增1446ltrgt协议6RNACLIP标签测序1456协议7RNA适配器凝胶回收和存储1458信息框1460第22章网关兼容酵母单杂交和双杂交系统1464介绍1465ltrgt方案1酵母单杂交DNA诱饵菌株的构建1474替代方案方案使用复性引物从DNA诱饵中获得入门克隆1481方案2酵母双杂交DB-诱饵菌株1484的生成方案3从激活域捕获库中识别相互作用分子1490方案4高效酵母转化1496方案5B-半乳糖苷酶活性的菌落转移比色测定1500方案6酵母克隆PCR1502信息框1504附录1试剂和缓冲液1507附录2常用技术1533ltrgt附录3检测系统项目1541附录4通用安全原则和危险材料1565索引1573史上最完整的生物实验技术核酸包括DNA和RNA两种分子，在细胞内以与蛋白质结合的状态存在。核酸提取是分子生物学实验技术中最重要、最基础的操作。载体的构建原理：依靠限制性内切酶、DNA连接酶等修饰酶的作用，对目的基因和载体DNA进行适当的切割和修饰后，将两者连接在一起，导入宿主细胞以实现目标基因在宿主细胞中的正确表达。今天小义要分享的是分子实验技术资源包，不仅更详细地阐述了分子实验技术的具体操作和流程，而且对基本原理和原理进行了深入的分析。各种技术的相关理论基础。课程内容：“向量的构造与识别”相关实验1.常见的载体2、克隆载体的构建3．表达载体的构建4．慢病毒载体5．腺病毒载体6．融合蛋白表达载体构建及质粒提取与分析的设计“核酸提取技术”相关实验1．DNA提取2．q-PCR3．RNA提取4．普通PCR5．实时定量PCR（realtime-QPCR）6．逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）“差异基因表达谱技术”1．基因测序技术培训班（基因组）2．基因测序技术培训班（转录组）3．基因芯片4．基因组学与蛋白质组学《细菌转化与细胞转染技术》1．细胞转染2．细菌转化3．iRNA转染操作视频（操作视频+课件）4.细菌转化-电穿孔法原理及操作视频《外源基因表达鉴定技术》1．ELISA技术2．Norther印迹技术3．RT-PCR技术4．蛋白质印迹技术5．酶联免疫吸附试验（ELISA）（视频+课件）6.Weterlottig（视频+课件）《蛋白质-核酸相互作用技术》1.凝胶迁移实验2．CHIP染色质共免疫沉淀法介绍3．蛋白质-核酸相互作用4．GelMigratioExerimet(EMSA)(Video+Coureware)5.Chromatiimmuoreciitatio(ChIP)(video+coureware)"ProteiIteractioTechology"1.GSTettlemettechology2.Yeattwo-hyridtechology3.Co-immuoreciitatiotechology4.Cellcolocalizatiotechology《ReorterGeeAalyiTechology》1.Ivivoreortergeeexerimet2.Ivitroreortergeeexerimet"GeeRecomiatio+Kockout+TargetigTechology"1.Geeticrecomiatiotechology2.Geetargetigtechology3.Geekockout4.GeecloigadDNAaalyi5.Trageicaimaltechology《StemCellSearatio,CultureadPurificatioTechology》1.CollectioofCacerStemCellCultureTechology2.Iolatioadidetificatioofcacertemcell3.Iolatioadcultureofratoemarrowmeechymaltemcellywholeoemarrowmethod(video+coureware)4.Iolatio,cultureadurificatioofhumaemryoictemcell5.Iolatio,cultureadurificatioofhumahematooietictemcell6.Iolatio,cultureadurificatioofmouemeechymaltemcell7、Baice-ookoftemcell8.Iolatio,cultureadurificatioofhumalaceta-derivedmeechymaltemcell"SmallRNAGeeEditigTechology"1.miRNAcloe+miRNART-PCR+miRNAqPCRrimerdeig2.miRNANortherBlot3.miRNAiituhyridizatio4.miRNAfuctioalcreeigadidetificatio5.IdetificatioofmiRNAtargetgee6.iRNAexerimet"No-codigRNADataaeadOlieAalyiTool"1.miRNA-lcRNArelatiohiredictiodataae2.miRNAtargetgeeredictiodataae3.miRNArelateddataae4.rRNArelateddataae5.iRNArelateddataae6.oRNArelateddataae7.RNArelateddataae8.tRNA-relateddataaeHigh-defiitiooeratioofmoleculariologyexerimetaltechologyHDvideotutorial+coureware1.DNAmethylatiodetectio2.Molecularcloigtechology3.High-reolutiomeltigcurveaalyi(HRM)4.IituhyridizatioCellexerimettechologyhigh-defiitiooeratiovideotutorial+coureware1.Ratkeletalmuclecellculture2.Cellaage3.Cellcryoreervatio4.Cellrecovery5.Cellcratche6.Cellivaio7.RatmoothmuclecellculturedytiuelockadherecemethodHigh-defiitiocoure+courewareofroteidetectioexerimetaltechology1.TUNELaaytodetectcellaotoi2.Immuohitochemitry(IHC)Proficietimoleculariologyexerimetaltechologye-ookwithzerofoudatio1.Modermoleculariologytechiqueadexerimetalkill2.RefiemetofMolecularBiologyExerimetGuide3.MolecularCloigExerimetGuide4thEditio(Volume1)4.MolecularCloigExerimetGuide4thEditio(Volume2)5.MolecularCloigExerimetGuide4thEditio(Volume2)...

2022-05-06 DNA寡核苷酸 dna寡核苷酸退火

编辑评论：狂热者是一本书，探讨了群众运动的一些共同特征，重点关注陷入狂热的暴民的个性。这本书充满了睿智的思想火花和尖锐的隐喻，格言仍然不断被引用和编辑。图书特色1、风靡全球半个世纪的畅销书——美国国家图书奖的传奇获得者霍弗，被里根总统授予勋章，其代表作《狂热者》风格相似蒙田和帕斯卡的散文，堪称法国“乌合之众”的兄弟。自1951年出版以来，它一直被视为社会科学领域的经典之作。它在短时间内售出超过500,000份，并被翻译成10多种语言。.2、社会心理学和群众运动的圣经-霍夫对“群众运动”一词进行了广泛的理解。他的证明和论证的例子包括宗教改革、清教革命、早期伊斯兰教、早期基督教、纳粹主义、法国大革命、太平天国、印度独立、锡安……“我并不是说这些运动都是相似的，家庭。"3、一句令东方和西方都感到惊讶的精致格言——失业者宁愿追随那些兜售希望的人，也不愿追随那些给予救济的人。在即将被同化的少数人中，有两种人很容易被群众运动所吸引，有成就的人和没有成就的人。如果狂热者是鱼，那么混乱就是水。在群众运动中，我们被赋予了“做坏事的权利”。爱国主义是黑帮最后的手段。还有很多。4、美国的“狂热分子”、德国的“我的奋斗”、法国的“乌合之众”——群众运动圣经“狂热分子”指出，大多数纳粹领导人都有艺术和文学抱负，但没有意识到能力。然而，也许希特勒是把“暴民”作为群众运动付诸实践的人。简介“我建议你有时间阅读《TheCrowd》《TheZealot》和《TheClaoftheCla》三本书。了解群体的心理非常有帮助，从中可以了解为什么群众的小事毁了政府。政府在工作中也运用了社会心理学的原理，可以用来预防很多社会问题。（中国社会科学院农村发展研究所余建荣教授）TheZealot探索了群众运动的一些共同特征，重点关注陷入狂热的乌合之众的个性。长期与下层打交道的生活经历让笔者发现，积极参与群众运动的人往往受挫。他们认为自己的生活彻底失败了，他们渴望逃离自己，他们寻求重生，他们对将自己的生命委托给某种神圣的事业感到满意，他们统一的集体生活掩盖了个人的责任、恐惧和无能。运动的领导者故意助长参与者的罪恶感，并呼吁为救赎而自我牺牲。自1951年出版以来，Faatic已成为社会科学的经典之作。它已售出超过500,000份，并已被翻译成10多种语言。是许多大学政治系的必读之书。《纽约时报》评价这本书“散发着冷酷的智慧，充满了尖锐的隐喻……这是一次野蛮的复习。”这本书充满了睿智的思想火花和尖锐的隐喻，格言仍然不断被引用和编辑。关于作者EricHoffer(1902-1983)，有着传奇的一生。7岁失明，15岁恢复视力。父母早逝，他自学成才。从事码头装卸工作多年。1964年成为加州大学伯克利分校的高级研究员后，他一直没有离开过被告席。他的许多思想都是在码头工作中形成的，因此他也被称为“码头哲学家”。1982年，他被里根总统授予总统自由勋章。他一生写了10多本书，包括《热情的心态》、《变革的试炼》、《时代的气质》等。“（TheTrueBeliever:ThoughtotheNatureofMaMovemet）是他的第一部著名作品。梁永安，台湾大学文化人类学学士、哲学硕士。翻译有《永恒的哲学》、《耶稣下落不明的岁月》、《隐士》、《智慧的黑暗之地》、《施尼茨勒的世纪》、《文化与抵抗》等。书籍内容码头工人哲学家-霍弗和他的书序言狂热者的心【Part1】群众运动的魅力第一章改变的愿望第2章对替代品的渴望第三章群众运动的可替代性【第二部分】潜在的皈依者第一章不受欢迎的人在人类事务中的作用第二章穷人第三章第4章极度自私的人第5章充满无限机遇的雄心勃勃的面孔第六章少数民族第7章烦人第8章罪犯【第三部分】团结与自我牺牲第一章前言第2章促进自我牺牲的方法第3章团结催化剂【第四部分】开始与结束第1章单词第2章狂热第三章务实行动的人第4章：良性和恶性的群众运动翻译表...

2022-05-06 狂热分子全文 狂热分子三部曲